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该试验采用胶原酶24h消化法分离猪半腱肌和背最长肌细胞,用差速贴壁法纯化骨骼肌卫星细胞.试验共分三部分进行:(1)在细胞培养液中添加不同浓度的类胰岛素生长因子(IGF-Ⅰ)(50ng/mL、100ng/mL和200ng/mL)、猪生长激素(pST)(40ng/mL、120ng/mL和360ng/mL)和胰岛素(0.1 μg/mL、1μg/mL和10μg/mL),用MTT法检测在培养至24、48和72h时的骨骼肌卫星细胞增殖状况,同时采用放射免疫测定法测定培养上清液中IGF-Ⅰ的含量;(2)在细胞培养至不同时间(48h、72h、96h和120h),抽提细胞总RNA,采用相对定量RT-PCR法检测骨骼肌卫星细胞IGF系统基因表达变化情况;(3)在上述实验的基础上,筛选出IGF-Ⅰ、pST和胰岛素的最适添加剂量,在培养液中分别添加IGF-Ⅰ(200ng/mL)、pST(40ng/mL)和胰岛素(10μg/mL),采用相对定量RT-PCR法检测外源性激素对IGF系统基因表达的影响.试验一结果显示:1在培养液中添加不同剂量的IGF-Ⅰ对骨骼肌卫星细胞有促进增殖作用,外源性IGF-Ⅰ对离体培养的猪骨骼肌(半腱肌和背最长肌)卫星细胞分泌IGF-Ⅰ的功能有显著的促进作用(p<0.05),且呈浓度依赖性.2在培养液中添加不同剂量的pST对猪骨骼肌(半腱肌和背最长肌)卫星细胞的增殖及分泌IGF-Ⅰ的功能均无显著的促进作用.3 在培养液中添加不同剂量的胰岛素对骨骼肌卫星细胞具促增殖作用.试验二结果显示:在不同培养时间(48h、72h、96h和120h),猪骨骼肌卫星细胞IGF-Ⅰ mRNA表达无显著变化(P>0.05).试验三结果显示:1外源性IGF-Ⅰ(200ng/mL)显著上调了半腱肌肌细胞IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和IGFBP-3mRNA水平和背最长肌细胞IGF-Ⅰ mRNA、IGF-Ⅰ RmRNA的表达(p<0.05).2外源性pST(40ng/mL)显著促进了半腱肌IGF-Ⅰ、IGFBP-3和背最长肌IGF-Ⅰ R基因表达水平(p<0.05).3外源性胰岛素(10μg/mL)降低了背最长肌IGFBP-3mRNA相对丰度(p<0.05),对骨骼肌细胞IGFBP-4和IGFBP-5mRNA水平有上调趋势,但差异不明显(P>0.05).