目的:B7-H1是B7共刺激分子家族的成员之一,在正常的组织表面几乎不表达,但在肿瘤组织确是高表达的,而且肿瘤组织表面的组成型B7-H1的表达还与肿瘤的发生发展及预后相关。B7-H1通过与其抑制性受体结合,分别在初始T细胞的初级反应阶段和活化阶段,记忆性T细胞的再次反应阶段起到重要的负性调节作用。B7-H1可诱导肿瘤抗原特异性CTL的凋亡,诱导肿瘤细胞的抗凋亡作用,在肿瘤的免疫逃逸、多药耐药、病毒感染、炎症、自身免疫疾病和移植物耐受等多种病理情况下发挥着重要作用,是肿瘤的潜在靶标和治疗靶点。由于目前对B7-H1的研究均限于细胞或组织表面组成型表达的B7-H1分子,而我们的预试验发现肿瘤患者血清中有可溶性B7-H1的表达,本课题拟通过证实血清中B7-H1可溶性片段的存在,探讨其功能和与肿瘤发生发展之间的相关性;由于市售抗B7-H1单抗仅有一种,我们通过制备B7-H1的单克隆抗体,建立较为简便的B7-H1的夹心ELISA血清学临床检测方法。方法:首先,我们通过B细胞杂交瘤技术制备鼠抗人B7-H1单克隆抗体,为检测血清中可溶性B7-H1片段奠定基础。然后,我们将SP2/0细胞皮下注射Babl/c小鼠,构建实体瘤模型,通过以下方法检测荷瘤小鼠的血清中可溶性B7-H1的表达:(1)采用Dot blot方法确定荷瘤小鼠血清中是否含有可溶性B7-H1;(2)采用Western blot方法鉴定可溶性B7-H1的分子量,以及其相对含量和小鼠荷瘤时间、瘤重的相关性,为研究肿瘤患者的可溶性B7-H1与其病程的相关性提供依据。最后,对肺癌患者血清及组织中可溶性和组成型的B7-H1进行了检测,包括:(1)采用Dot blot方法确定肺癌患者血清中是否含有可溶性B7-H1片段;(2)采用Western blot方法确定可溶性B7-H1片段的分子量;(3)建立可溶性B7-H1的夹心ELISA临床检测方法,并对10例肿瘤患者血清的可溶性B7-H1含量进行测定。(4)对肺癌病人的肿瘤组织进行免疫组化染色以确定其有组成型B7-H1的表达。结果:用人源性B7-H1IgV样区混合佐剂免疫Babl/c小鼠,最终获得了一株高亲和力的单克隆抗体。对荷瘤小鼠的血清检测结果:(1)Dot blot结果显示荷瘤小鼠血清中确含有可溶性B7-H1片段,且不同个体的含量不同;(2)Western blot结果显示,可溶性片段的分子量约为37kD,但其相对含量与荷瘤时间和瘤重无明显相关性。对肺癌患者血清和肿瘤组织的检测:(1)Dot blot结果显示肺癌患者血清中确含有可溶性B7-H1片段,且不同个体的含量不同;(2)Western blot结果显示,可溶性片段的分子量约为42kD;(3)建立了夹心ELISA检测血清中可溶性B7-H1含量的检测方法,并分析10例患者血清中可溶性B7-H1的含量,但由于缺少临床病例资料,暂时还无法对此含量和癌症发生发展的关系作出评价;(4)对采血对象的肿瘤组织免疫组化结果显示,肿瘤组织胞浆中有组成型的B7-H1表达。结论:成功地制备了一株单克隆抗体。建立了血清可溶性B7-H1的检测方法,并成功证实了可溶性B7-H1片段的存在,为临床检测奠定了基础。可溶性B7-H1与肿瘤发生发展以及预后的相关性仍需进一步研究。