疟疾是联合国千年发展目标中重点防控的三种传染病之一,疟疾和艾滋病、结核病一起被世界卫生组织列为全球急需控制的三大公共卫生问题。在感染人类的四种疟原虫中,以恶性疟和间日疟分布最为广泛,尽管间日疟的致病性没有恶性疟强,但由于其分布范围广、易复发等特点,使得间日疟的控制比恶性疟更为困难。由于受到多种因素的影响,我国中部地区近几年的间日疟疫情明显回升,连续出现小暴发点和局部暴发流行。嗜人按蚊和中华按蚊被认为是我国分布范围最广的疟疾传播媒介,也是我国间日疟传播的主要媒介。关于中华按蚊和嗜人按蚊对间日疟原虫的易感性研究以及结合媒介生物学特性进行的传疟作用和传疟地位的评定一直以来都是疟疾传播媒介研究中的热点。按蚊对疟原虫易感性研究最直接的方法就是将疟原虫感染按蚊,而其中应用最广泛的就是体外人工膜饲血感染系统。本研究的目的是比较我国的主要传疟媒介----中华按蚊和嗜人按蚊对间日疟原虫的易感性,并评价其在我国中部间日疟流行地区疟疾传播过程中的作用。为不同媒介按蚊疟疾流行地区的疫情控制提供科学依据。研究包括三个部分:第一部分:按蚊实验室体外人工膜饲血感染系统的建立目的:通过改进新引进的实验室按蚊体外人工膜饲血设备和技术,建立了适合我国开展疟疾传播媒介对疟原虫易感性实验研究需要的新的实验室按蚊体外人工膜饲感染系统。方法:利用引进的按蚊体外人工膜饲设备,在实验室用嗜人按蚊江苏株为实验蚊种,以正常人全血为饲血样本,对影响按蚊吸血的多种因素进行实验研究和比较。结果:1.羽化后3-8日龄间的按蚊的吸血率无显著差异,考虑感染按蚊的寿命,选择3-4日龄的按蚊进行人工感染更合适。2.虽然饥饿时间在8-24小时和24小时以上的按蚊的吸血率存在显著差异,但综合考虑按蚊吸血率和死亡率的相互关系,选择按蚊饲血前饥饿时间8-12小时为宜。3.嗜人按蚊在夜晚的膜饲吸血率显著高于白天,但在白天用黑布覆盖蚊笼模似夜晚和不覆盖黑布的膜饲吸血率无显著差异,蚊笼大小对膜饲吸血率也无显著差异。第二部分:中华按蚊和嗜人按蚊对间日疟原虫易感性的研究目的:利用新建立的按蚊体外人工膜饲感染系统,进行中华按蚊和嗜人按蚊对间日疟原虫的易感性实验研究。方法:分别用中华按蚊江苏实验株和现场F1株以及江苏、辽宁和广东珠海的嗜人按蚊,利用新建立的体外人工感染系统,在实验室配对体外人工感染在我国中部疟疾流行地区采集的间日疟患者血样。结果:1.中华按蚊江苏实验株和现场F1株共配对感染10批次,两者的卵囊和子孢子感染率及其阳性蚊比均无显著差异。2.江苏实验株中华按蚊和嗜人按蚊共配对感染142批次,两者的卵囊和子孢子感染率及其阳性蚊比均无显著差异;虽然中华按蚊的卵囊感染度高于嗜人按蚊,但两者的子孢子感染度无显著差异。3.江苏、广东、辽宁嗜人按蚊共配对感染35批次,三地区嗜人按蚊间的卵囊和子孢子感染率、及其阳性蚊比均无显著差异。第三部分:影响间日疟原虫在按蚊体内发育的因素分析目的:比较不同因素对按蚊实验室体外人工感染间日疟原虫结果的影响。方法:分别比较中华按蚊和嗜人按蚊对发作间歇期和临床发作期间日疟原虫的易感性;分析配子体密度、配子体的雌雄比与中华按蚊和嗜人按蚊卵囊、子孢子感染的关联;判断中华按蚊和嗜人按蚊的卵囊感染度与子孢子发育的相关性。结果:1.中华按蚊对临床间歇期间日疟原虫的卵囊阳性率、卵囊阳性蚊比率、子孢子阳性蚊比率和子孢子感染度均高于临床发作期间日疟原虫。2.嗜人按蚊对临床间歇期间日疟原虫的卵囊阳性蚊比率、子孢子阳性率和子孢子阳性蚊比率均显著高于临床发作期间日疟原虫。3.中华按蚊和嗜人按蚊的卵囊和子孢子感染率和感染度均与配子体的密度有相关关系,而与配子体的雌雄比例没有相关关系。4.中华按蚊和嗜人按蚊的卵囊感染度越高,其子孢子感染几率和感染度就越高。研究结论1.新建立的实验室按蚊体外人工膜饲感染系统适合于我国用于开展疟疾传播媒介对疟原虫易感性实验研究的需要,在按蚊体外人工膜饲感染实验操作的标准化和规范化方面有很大提高,为我国不同实验室间疟疾传播媒介对疟原虫易感性实验研究数据的相互比较和实验结果的比较分析打下基础。2.中华按蚊实验株可替代现场捕获的中华按蚊F1代用于中华按蚊对间日疟原虫易感性的实验研究。3.辽宁和广东横琴岛新发现的嗜人按蚊对间日疟原虫易感,其对间日疟原虫的易感性与我国中部的嗜人按蚊无显著差异。4.新发现中华按蚊对当前我国中部疟疾流行区的间日疟原虫易感性与嗜人按蚊易感性类似,有必要进一步开展不同基因型间日疟原虫对中华按蚊易感性的研究,为在以中华按蚊为主要媒介地区修订和制定防治策略和措施提供参考依据。5.在按蚊体外人工膜饲感染的实验研究中,不同临床发作期的间日疟原虫血样本、疟原虫配子体密度与按蚊卵囊和子孢子感染率和感染度的高低有一定的关系,但与疟原虫配子体的雌雄比例无关。创新点:1.建立了适合我国传播媒介对疟原虫易感性研究所需的新的实验室按蚊体外人工膜饲感染系统。2.首次通过实验证实辽宁和广东横琴岛新发现的嗜人按蚊对间日疟原虫易感,且其易感性与我国中部的嗜人按蚊无显著差异。3.新发现中华按蚊对当前我国中部疟疾流行区的间日疟原虫易感性与嗜人按蚊易感性相当。