体内培养下兔半月板碎块大小与组织生物活性关系的研究

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目的:1.建立半月板碎块皮下培养模型的可行性分析;2.观察体内皮下培养下兔半月板不同大小的碎块与其生物活性的关系。方法:1、取健康成年新西兰大白兔72只,6月龄,随机分为3组,每组24只新西兰大白兔;2、无菌条件下分别取其相同体积及重量的自体成年半月板中内2/3区域组织,分别加工成a组0.5mm*0.5mm*0.5mm、b组1mm*1mm*1mm、 c组2mm*2mm*2mm大小均匀的碎块,PGA/PLA复合膜包裹后自体皮下培养;3、于培养的第0、1、2、3周各任选6只新西兰大白兔取出半月板碎块与PGA/PLA复合模型,高渗盐水冲洗3次,10%福尔马林固定48小时,石蜡包埋,切片,厚度4-6/um,I型胶原及II型胶原免疫组织化学染色观察;4、于培养的第0、1、2、3周各任选6只新西兰大白兔取出半月板碎块与PGA/PLA复合模型,高渗盐水冲洗3次,10%福尔马林固定48小时,石蜡包埋,切片,厚度4-6/um,HE染色观察;5、于培养的第0、1、2、3周各任选6只新西兰大白兔取出半月板碎块与PGA/PLA复合模型,高渗盐水冲洗3次,10%福尔马林固定48小时,石蜡包埋,切片,厚度4-6/um,番红O染色观察。结果:1.培养3周时,a组HE染色显示半月板碎块中心区域纤维软骨细胞逐渐向周围迁移。2、随着培养时间的延长,番红O染色图像分析结果显示, a组、b组和c组标本的番红O染色程度都逐渐变淡;培养3周时,a组番红O染色程度相对其他两组颜色深,有统计学意义(P﹤0.05),b组和c组染色程度相当,无统计学意义(P>0.05);3、随着培养时间的延长,II型胶原免疫组织化学染色的灰度值呈上升趋势, I型胶原免疫组织化学染色的灰度值呈下降的趋势;4、培养3周时,a组II型胶原免疫组织化学染色相对其他两组,灰度值减少,有统计学意义(P﹤0.05);5、培养3周时,a组I型胶原免疫组织化学染色相对其他两组,灰度值减少,有统计学意义(P﹤0.05)。结论:1、成功建立成功建立半月板碎块皮下培养模型;并随着体内培养时间的延长,半月板组织内I型胶原的合成代谢呈上升的趋势,II型胶原和蛋白多糖呈下降的趋势;2、体内皮下培养环境下,半月板碎块越小其组织的合成代谢能力越强。
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