论文部分内容阅读
目的:近来的研究证实突触功能的改变,与阿尔茨海默病(AD)认知功能减退关系最为密切,可溶性β-淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体是引起认知功能减退的主要因素。Aβ的神经毒性与N-甲基-D-天(门)冬氨酸(NMDA)受体关系密切,但在Ap的毒性作用下,NMDA受体在细胞及突触的不同部位的分布变化以及因此导致的突触功能紊乱的作用机制尚不清楚。已知NMDA受体亚型的构成及分布具有明显的发育和区域特征,并与突触后密度蛋白有密切关系,但其在海马亚区中的分布模式尚不明了。
方法:我们以原代培养的海马神经元作为模型,应用免疫荧光染色,检测Aβ作用下突触内NMDA受体亚单位的变化情况;应用western blot半定量分析法检测Aβ作用下NMDA受体亚单位和突触相关蛋白SAP102在全细胞水平的蛋白表达;应用生物素化分析方法,检测在细胞表面和发生内化的NMDA受体亚单位水平;此外,还应用免疫荧光方法对NR2B及突触后蛋白PSD-95和SAP102进行染色,观测它们在出生后大鼠海马不同亚区的表达。
结果:
1.Aβ可引起突触内NR1和NR2B亚单位的表达减少,而对突触内NR2A的表达无显著影响。
2.Aβ(10μM,1h)对NMDA受体亚单位的全细胞蛋白水平没有影响。
3.Aβ可促进神经元表面NR1和NR2B受体亚单位的内化。
4.Aβ可引起突触相关蛋白SAP102的减少。
5.NR2B在大鼠海马出生时即有高表达,早期尤以细胞层表达明显,伴随生后发育,NR2B在大鼠海马各亚区的表达逐渐减弱。
6.PSD-95在刚出生的大鼠海马中表达较低,伴随发育,其表达逐渐增加直至成年,且在树突层分布明显。
7.在CA3区透明层,NR2B及PSD-95表达均较低。
8.在CA3和DG区的多形层,NR2B和PSD-95之间存在负相关。
9.SAP102在出生后大鼠海马中即有明显的高水平表达,且伴随着发育,表达逐渐增加,至成年稍有下降,但仍然保持在较高的表达水平。
结论:
1.Aβ早期的突触毒性作用,对NMDA亚单位的总量并无影响,而更可能是通过诱导NDMA受体亚单位在细胞和突触的不同位置之间的转移,以及突触相关蛋白数量和功能的下降,从而降低突触功能而实现的,此可作为AD早期治疗的参考依据之一。
2.NR2B,PSD-95和SAP102在生后海马不同区域的表达和分布模式,反应了突触的运输,形成及稳定的动态过程以及对突触可塑性的不同调节。无论是NMDA亚单位还是突触后相关蛋白数量的变化,或是两者间相互作用的改变,均对突触功能产生重要影响。因此,从NMDA亚单位与突触后相关蛋白之间联系的角度出发,探索有关疾病的治疗,将是一个更具针对性的举措。