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草菇(Volvariella volvacea)起源于中国，迄今已有300多年的栽培历史。草菇是典型的热带高温型食用菌，菌丝对低温的抵抗力差，对环境条件的变化尤其是温度的变化很敏感。与大多数食用菌相比，草菇存在着冷害，即在4℃的低温条件下保存，菌丝会发生自溶而导致菌种死亡和子实体发软，液化直至腐烂。这给草菇的菌种保存和产后保鲜带来了极大的困难。本文通过草菇原生质体复合诱变以低温为筛选指标，选育出耐低温草菇菌株VH3，并对其机理进行了探讨。主要研究结果如下： 1．研究并建立了草菇原生质体制备和再生的最佳条件：溶壁酶浓度2％，温度32℃，pH自然状态下的0.8mol/L甘露醇为渗透压稳定剂，菌龄为3d的菌丝酶解2h(验证、重复王辅德等实验)。 2．通过UV、“Co-γ射线、DES对草菇V23原生质体进行复合诱变；从近1500株诱变菌株中选育出耐常规低温(4℃)时间≥10d菌株VH1、VH2、VH3、VH4。除VH1以外，各诱变株在较低温度(18、22、26、28、30℃)下生长速度明显高于CK。 3．突变株均与出发菌株V23(CK)有较明显的拮抗现象，RAPD分析发现诱变株的平均变异系数为0.831。26℃、28℃、30℃时，VH3生物学效率分别高出出发菌株145.5％，115％，44％；且其最佳出菇温度为28℃，在26℃时仍然可以正常出菇。稳定性实验表明，VH3耐低温及生物学效率均较稳定，说明VH3是适合低温栽培的优良菌株。 4．在4℃，15℃，25℃时分别进行草菇子实体贮藏试验发现，三种温度条件下，诱变株的贮藏期均高于CK。4℃时，VH1和VH3的贮藏期比CK高出50％。草菇在15℃时贮藏期最长，其次是25℃，4℃时最短。草菇子实体氨基酸组成分析表明，总氨基酸含量没有明显差别，VH3比CK谷氨酸含量高。 5．同工酶分析发现，VH3酯酶和过氧化物同工酶均发生了较大的变化。总蛋白研究发现草菇V23在低温诱导时有低温诱导蛋白PZ1产生，但是在草菇VH3中却没有发现该蛋白产生；在VH3中发现特异性蛋白PZ2。SDS-PAGE电泳发现PZ1由两个亚基组成，分子量为42KD、21KD；PZ2由一个亚基组成，分子量为75KD。两蛋白的等电点分别为草菇耐低温菌株的诱变选育与分子生物学鉴定4 .8、5 .7 5. 6 .NORTHERN杂交发现从低温诱导草菇中分离到的低温诱导基因片段在vH3中有少量表达。 通过分析发现vH3是适合于低温栽培(26℃、28℃)的优良草菇菌株.从低温诱导v23中分离到的低温诱导基因片段在VH3中有少量表达，表明草菇在低温协迫下和诱变株vH3的耐低温机理有相似之处.