齐口裂腹鱼无乳链球菌的分离鉴定及其感染的病理学研究

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无乳链球菌(Streptococcus agalactiae),又称为B群链球菌,是一种典型的人-兽-鱼共患病原菌,普遍存在于世界各地,严重威胁着人类和动物的健康。自1958年日本首次报道虹鳟感染链球菌的病例后,相继有大量的关于无乳链球菌感染养殖鱼和野生鱼类的报道,给世界养殖业造成巨大的经济损失。2012与2013年的7-10月四川齐口裂腹鱼养殖场流行一种临床特征为突眼、体表出血和神经症状的传染病,在肝、肾涂片检查中发现链状G球菌。从自然发病鱼肝、肾分离到2株形态与涂片检查一致的G+链状球菌(DML120817、YZH130830),其在BHI平板上28℃培养48h,形成白色圆形、表面光滑、边缘整齐的针尖大小菌落;根据分离菌株的形态学和生理生化检测结果初步判定其为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);16S rRNA基因序列分析表明,2分离株(GenBank登录号:KF773744、KF761304)与GenBank中S. agalactiae 16S rDNA序列同源性达96.5%以上,在以分离菌16S rDNA序列(GenBank登陆号KF773744与KF761304)及其GenBank中同源性较高的链球菌16S rDNA序列构建的系统发育树上,分离菌与S. agalactiae聚为一族;同时在基于无乳链球菌cfb基因进行的特异性PCR检测中,分离菌均为阳性。对自然感染鱼进行病理剖解观察其眼观病变,同时取心、肝脏、肾脏、脾脏、肠、脑、肌肉和鳃等组织,10%甲醛溶液固定,常规石蜡切片,观察无乳链球菌感染造成的病理损伤。结果表明,感染鱼主要表现突眼、体表出血和神经症状的临床表现;病理组织学观察发现,S. agalactiae感染齐口裂腹鱼对多组织器官都造成明显的病理损伤,尤其是肝、肾、脾、和脑的损伤较为严重,表现为明显的变性、坏死以及炎症细胞浸润,主要表现为肝炎、急性脾炎、间质性肾炎、脑膜脑炎、心外膜炎。超微结构上,球状的S. agalactiae侵入肝细胞、肾小管上皮细胞、肾间质、脾髓、淋巴细胞与脑内,部分细菌见荚膜形成,被侵袭细胞的线粒体肿胀,嵴断裂,溶解,内质网扩张,甚至细胞器结构完全破坏,溶解,细胞膜破裂溶解。脑内胶质细胞增生,核膜扩张,神经纤维髓鞘变性,溶解。同时在肝毛细血管与肝血窦内,肝、脾和肾间质的巨噬细胞与内皮细胞内见多量菌体,且一些菌体处于分裂状态。
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