论文部分内容阅读
目的:观察透骨消痛胶囊含药血清对正常及退变软骨细胞增殖速率和细胞周期分布的影响,从细胞学的角度上探讨透骨消痛胶囊对正常及退变软骨细胞增殖的干预作用。方法:1.含药血清及不含药血清的制备:取健康六月龄新西兰大白兔16只,雌雄各半,随机分成2组,即模型组与给药组。给药组予以透骨消痛胶囊水溶液灌胃,模型组则以等量的生理盐水灌胃。取模型组与给药组动物血清制备含透骨消痛胶囊含药血清和不含药血清。2.含药血清和不含药血清培养第3代软骨细胞:取健康六月龄新西兰大白兔16只,雌雄各半,随机分成2组,即正常组与造模组,通过改良Hulth法,对造模组动物实施造模手术。喂养1周后,开始强迫造模组兔每日活动1次,每次1h。8周后处死动物,分离并培养正常组和造模组动物软骨细胞,培养至第三代,用甲苯胺蓝染液对其进行鉴定。取第3代正常及退变软骨细胞用含药血清与不含药血清进行培养,分为A组(正常软骨细胞不含药血清组)、B组(正常软骨细胞含药血清组)、C组(退变软骨细胞不含药血清组)、D组(退变软骨细胞含药血清组)。用光镜对增殖的软骨细胞进行组织形态学观察,MTT法测细胞相对数,用流式细胞仪测软骨细胞周期分布。结果:1.倒置显微镜观察血清培养后的正常及退变软骨细胞形态,增殖后的正常软骨细胞呈多角形或长梭形,细胞核清晰;增殖后的退变软骨细胞呈多角形或长梭形,部分细胞核固缩,有的偏向一侧。2.MTT检测显示,各组软骨细胞增殖速度B组>A组>D组>C组,其中B组>A组(P<0.05),B组>C组(P<0.05),B组>D组(P<0.05),A组>C组(P<0.05),A组>D组(P<0.05),D组>C组(P<0.05)。3.流式细胞仪检测显示,各组软骨细胞周期分布随着时间的变化以及血清干预而发生变化。干预24、48、72h,B组含药血清S、G2/M期比例上升及PI升高高于同期A组不含药血清(P<0.05),D组含药血清S、G2/M期比例上升及PI升高高于同期C组(P<0.05),C、D组退变软骨细胞的S、G2/M期比例、PI值均低于A、B组正常软骨细胞(P<0.05)。结论:透骨消痛胶囊含药血清能促进正常及退变软骨细胞的增殖,但不能完全使退变软骨细胞达到正常软骨细胞的增殖水平。