【摘 要】
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DNA甲基化是表观遗传修饰重要方式之一,参与调节植物生长发育及进化等一系列生命过程。DNA甲基化的建立和维持依靠DNA甲基转移酶的参与。本论文以乌拉尔甘草为材料,通过PCR技术分离到甘草中疑似甲基转移酶基因部分序列,通过相关生物信息学分析,得到初步确认。构建了其与苜蓿、拟南芥等20个物种相关基因的系统进化树;采用实时荧光定量技术(RT-qPCR)研究了甘草幼苗中三类甲基转移酶基因经过高压静电场处理
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DNA甲基化是表观遗传修饰重要方式之一,参与调节植物生长发育及进化等一系列生命过程。DNA甲基化的建立和维持依靠DNA甲基转移酶的参与。本论文以乌拉尔甘草为材料,通过PCR技术分离到甘草中疑似甲基转移酶基因部分序列,通过相关生物信息学分析,得到初步确认。构建了其与苜蓿、拟南芥等20个物种相关基因的系统进化树;采用实时荧光定量技术(RT-qPCR)研究了甘草幼苗中三类甲基转移酶基因经过高压静电场处理的表达情况。主要结果如下:1、采用简并引物PCR扩增的方法,从甘草基因组中分离出了MET1类、DRM类和CMT类甲基转移酶基因片段各一条。MET1类甲基转移酶目的片段长度为951bp,与豌豆MET1基因核酸序列相似性为92.63%;DRM类甲基转移酶目的片段长度为357bp,与苜蓿DRM2基因核酸序列相似性为92.37%;CMT类甲基转移酶目的片段长度为692bp,与苜蓿CMT1基因核酸序列相似性为83.97%。2、采用系统进化分析法构建了甘草MET1类、DRM类和CMT类甲基转移酶基因和其它20余物种的进化树,甘草的MET1类甲基转移酶和鹰嘴豆距离很近,与DRM类甲基转移酶距离最近的是苜蓿,CMT类甲基转移酶与苜蓿和鹰嘴豆的分支距离最近。3、高压静电场处理的甘草在不同生长时期甲基转移酶基因的表达情况发生不同的变化,三类甲基转移酶对于不同电场强度的响应有别。(1)当电场条件为E3(18 kV/cm,25 min)时,三类甲基转移酶均呈现上调表达趋势。(2)高压静电场处理条件下,三类甲基转移酶基因表达量出现上调与下调的情况,说明静电场对甘草的甲基化调控既有促进又有抑制。
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