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乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)是引起病毒性肝炎的主要病原体之一,乙肝在全世界范围内广泛流行,经粗略估计,全世界约30%的人口血清学检测显示其曾经或仍然处于乙肝病毒感染状态。而在所有的肝癌患者中,半数是由于乙肝病毒感染所致。鉴于此,全球卫生组织已将病毒性肝炎囊括进了重大公共卫生优先项目中。具有临床意义的乙肝病毒蛋白主要包括乙肝核心抗原,乙肝e抗原和乙肝c抗原,其中乙肝e抗原(hepatitis B virus e antigen, HBeAg)是乙肝病毒内核的主要结构蛋白,血清中的HBeAg是一种病毒标志物,是乙肝病毒在人体内复制过程中的一个主要产物,该抗原不仅在临床上被用作为判断HBV活动性复制的指标之一,还在慢性乙肝的最基本治疗,即抗病毒治疗中发挥中重要的指导作用,更有研究显示,HBeAg在母婴传播中也起着重要。但是传统的酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测HBeAg存在灵敏度低,假阳性,重复性差等缺点。核酸适体是一段经体外筛选得到的单链DNA或RN A,由于其特殊的理化性质,目前能用抗原抗体反应进行诊断的技术几乎都可以用适体替代。本文以特异性检测IBeAg为目标,围绕核酸适体进行了筛选、结合荧光和金纳米优化检测条件的一系列实验。本文的主要研究内容如下：1)HBeAg特异性DNA适体的筛选和分析：利用体外配体指数富集系统进化(SELEX)技术对特异性结合HBeAg蛋白的DNA适体进行筛选,采用牛血清蛋白进行阴性筛选以提高筛选效率,利用磁分离对结合HBeAg蛋白的适体和未结合的游离核酸进行分离,采用不对称PCR扩增的方法得到单一的ssDNA,对筛选得到的产物进行克隆测序,并将测序所得的适体除去上下游引物后进行和首轮ssDNA文库对比的亲和性检测,最后进行二级结构分析。(第二章内容)2)核酸适体荧光法检测HBeAg:将亲和性最高的组别作为最终适体,以HBeAg适体与其互补的核酸形成杂交双链和其特异性结合HBeAg蛋白的能力为基础,通过在HBeAg适体上修饰荧光基团FAM,在其互补序列上修饰荧光猝灭基团的方式,达到对HBeAg蛋白快速定量检测的目的。(第三章内容)3)核酸适体结合金纳米检测HBeAg蛋白：采用柠檬酸钠还原法合成金纳米粒子,制备尺寸均一、单分散的纳米金粒子,通过紫外分光光度计、透射电子显微镜对金纳米粒子进行表征。将制备所得的金纳米与DNA适体结合,利用金纳米的光学性质,结合紫外分光光度计进行HBeAg蛋白检测和分析。 (第四章内容)