【摘 要】
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目的:通过观察不同时长循环机械按压内关穴对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠的心肌保护效应差异,确定最佳时长;观察与NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎症信号通路的相关性,为循环机械按压内关穴抗MIRI的干预时机及机制研究提供新的证据。方法:将45只SPF级雄性SD大鼠使用维持饲料常规饲养一周后,随机分为假手术组、模型组、循环机械按压1d组、循环机械按压3d组、循环机械按压5d组,各组9只
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目,81974583,基于自噬-炎症调控的电针预处理减轻心肌IR损伤的mTOR/NLRP3信号机制研究,2020/01/01-2023/12/31,56万元,在研； 江苏省中医药领军人才项目,SLJ0226,推拿抗心肌缺血再灌注损伤的自噬相关机制研究,2018/06-2021/05,100 万元,已结题；
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目的:通过观察不同时长循环机械按压内关穴对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠的心肌保护效应差异,确定最佳时长;观察与NLRP3/Caspase-1/IL-1β炎症信号通路的相关性,为循环机械按压内关穴抗MIRI的干预时机及机制研究提供新的证据。方法:将45只SPF级雄性SD大鼠使用维持饲料常规饲养一周后,随机分为假手术组、模型组、循环机械按压1d组、循环机械按压3d组、循环机械按压5d组,各组9只。循环机械按压组（1d、3d、5d）通过自制仪器按压两侧“内关穴”,作用面为直径3mm的圆形硅胶头,按压刺激量为150g,具体按压方式为按压5min,放松5min为1循环,每天按压3个循环,共30min。干预天数分别为1d、3d、5d。其中模型组、循环机械按压1d、3d、5d组结扎冠状动脉左前降支（LAD）建立心肌缺血再灌注损伤（MIRI）大鼠模型,假手术组只进行穿线但不结扎。监测造模前、造模后、再灌注4h心电图（ECG）情况,观察造模前、造模后、再灌注4h标准肢体Ⅱ导联ST段电位偏移值情况;超声心动图监测造模前、再灌注4h左室射血分数（LVEF）;TTC染色法计算心肌梗死面积,比较不同时长循环机械按压的效应差异;HE染色观察各组大鼠心肌组织病理形态变化;Western blot法分析心肌组织内NLRP3、Capase-1、IL-1β蛋白的表达情况。结果:1)ECG结果显示,造模前,各组ST段电位偏移值无显著变化。造模后30min期间,与假手术组相比,模型组、循环机械按压（1d、3d、5d）组ST段偏移值升高（P＜0.05）;与模型组相比,循环机械按压组（1d、3d、5d）ST段偏移值显著下降（P＜0.05或P＜0.001）;与循环机械按压1d组相比,循环机械按压（3d、5d）组ST段偏移值明显下降（P＜0.05）,循环机械按压3d组与循环机械按压5d组ST偏移值对比不具有统计学差异（P＞0.05）。再灌注4h期间,与假手术组相比,模型组、循环机械按压（1d、3d、5d）组ST段偏移值升高（P＜0.05）;与模型组相比,循环机械按压（1d、3d、5d）组ST段偏移值显著下降（P＜0.001）;与循环机械按压1d组相比,循环机械按压（3d、5d）组ST段偏移值显著下降（P＜0.001）;循环机械按压3d组与循环机械按压5d组ST段偏移值差异无统计学意义（P＞0.05）。2)超声心动图结果显示,与假手术组相比,模型组、循环机械按压（1d、3d、5d）组左室EF值降低（P＜0.05）;与模型组相比,循环机械按压（1d、3d、5d）组EF值较升高（P＜0.05）;与循环机械按压1d组相比,循环机械按压（3d、5d）组EF值显著升高,其中3d左心室EF值显著升高（P＜0.001）;循环机械按压3d组与循环机械按压5d组EF值无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。3)TTC结果显示,与假手术组相比,模型组、循环机械按压（1d、3d、5d）组大鼠心肌梗死面积百分比增加（P＜0.05）;与模型组相比,循环机械按压（3d、5d）组大鼠心肌梗死面积百分比明显减少（P＜0.05）,其中以3d心肌梗死面积显著降低（P＜0.001）;与循环机械按压1d组相比,循环机械按压3d组心肌梗死面积明显降低（P＜0.05）;循环机械按压3d组与循环机械按压5d组心肌梗死面积变化无统计学意义（P＞0.05）。4)HE结果显示,模型组较假手术组心肌病理形态排列紊乱,心肌纤维断裂,间质水肿,大量炎性细胞浸润;循环机械按压（1d、3d、5d）组较模型组心肌纤维断裂、排列紊乱程度减轻,炎性细胞浸润减少;5)Western Blot结果显示,和假手术组相相比,模型组心肌组织NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达量增加（P＜0.05）;与模型组相比,循环机械按压（3d、5d）组NLRP3蛋白表达水平显著降低,循环机械按压3d组IL-1β蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;循环机械按压（1d、3d、5d）组Caspase-1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与循环机械按压1d组相比,循环机械按压（3d、5d）组NLRP3蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,循环机械按压3d组Caspase-1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与循环机械按压5d组相比,循环机械按压3d组Caspase-1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论:1)通过结扎LAD方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型可靠。2)不同时长（1d、3d、5d）循环机械按压内关穴均能通过降低ST段偏移值、降低MIRI心肌梗死面积,提高左室EF值,发挥心肌保护效应,其中以3d为最佳。3)不同时长（1d、3d、5d）循坏机械按压内关穴可以减轻心肌纤维损伤和炎性细胞浸润。4)不同时长（1d、3d、5d）循环机械按压内关穴可能通过NLRP3/Caspase-1/IL-1β途径,下调NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达水平,减轻炎症反应,进而改善心肌缺血再灌注损伤,以3d为最佳。
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