【摘 要】
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目的:构建VEGF-C基因siRNA的慢病毒载体,观察其对人膀胱癌T24细胞的影响。方法:体外构建针对VEGF-C基因的siRNA的重组质粒,转染T24细胞;应用RT-PCR检测VEGF-C基因的表达。利
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目的:构建VEGF-C基因siRNA的慢病毒载体,观察其对人膀胱癌T24细胞的影响。方法:体外构建针对VEGF-C基因的siRNA的重组质粒,转染T24细胞;应用RT-PCR检测VEGF-C基因的表达。利用ELISA法检测VEGF-C蛋白的水平、MTT法检测基因干扰对T24细胞增殖的影响。结果:阳性克隆测序结果示目的基因克隆正确,可以进一步检测该基因在细胞内的表达水平。Western Blot显示,PSC1261靶点对目的基因有显著的敲减作用,因而是最佳靶点。荧光观察结果示:T24细胞的感染效率＞80%。RT-PCR示靶点在T24细胞上对VEGF-C基因有显著敲减(P＜0.05):转染组VEGF-C基因的表达下调到对照组的15%。ELISA示基因干扰能显著降低T24细胞VEGF-C的表达(P＜0.05)。MTT显示RNAi抑制T24细胞的增殖(P＜0.05)。结论:本实验成功地构建了VEGF-C基因靶向RNAi真核表达载体,并有效地抑制了T24细胞VEGF-C基因的表达,抑制了T24细胞的增殖。为进一步研究VEGF-C在膀胱癌淋巴管生成、淋巴结转移中作用奠定了基础。
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