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第一部分 人鼻病毒亚型及其病毒载量与儿童重症呼吸道感染的关系研究背景及目的:人鼻病毒(Human rhinovirus, HRV)不仅引起普通感冒,还与支气管炎、毛细支气管炎、肺炎和哮喘急性发作有关。HRV感染导致严重急性呼吸道感染(Acute respiratory tract infection, ARTI)与病毒亚型和载量有关,但HRV各亚型及其病毒载量与严重ARTI之间的关系尚未彻底阐明。本研究目的在于探讨重庆地区ARTI住院儿童中HRV不同亚型的临床特点,尤其在导致重症呼吸道感染方面的差异,另一方面探讨HRV不同亚型的病毒载量与重症呼吸道感染之间的关系。方法:收集2012年1月到2014年11月在重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心ARTI住院患儿的鼻咽抽吸物(Nasopharyngeal aspirate, NPA)标本,采用多种PCR方法对常见呼吸道病毒进行检测。通过测定VP4/VP2区域序列鉴别HRV亚型,HRV阳性标本采用实时荧光定量PCR方法进行病毒载量测定。结果:1876份NPA标本中检出HRV 473份(25.2%),VP4/VP2序列分析结果显示HRV-A 254份(53.7%)、HRV-B 28份(5.9%),HRV-C122份(25.8%),未分型69份(14.6%)。HRV-C与HRV-A比较发现除HRV-C检出患儿更易出现喘息症状外(66.2% vs.45.4%,P=0.007),其他临床特点均无差异,包括在致重症肺炎和重症哮喘发作方面。Logistic回归分析表明HRV各亚型在引起重症病例(包括重症肺炎和重症哮喘发作)方面无差异。以106copies/mL来划分病毒高载量和低载量,HRV单一检出时,HRV-A高载量组更易出现重症肺炎(36.4% vs.12.7%,P=0.023);但HRV-C高低载量组间在致重症肺炎方面无差异(25.0% vs.25.0%,P=0.559)。年龄<2岁患儿,重症肺炎组HRV-A病毒载量较非重症肺炎组高(4.7×105 copies/mL vs.8.1×104 copies/mL, P=0.042);重症肺炎组HRV-C与非重症肺炎组间病毒载量无差异(7.9×103 copies/mL vs.1×104 copies/mL, P=0.589)。结论:重庆地区HRV是引起急性呼吸道感染住院患儿的重要病原体,HRV-C较HRV-A更易引起患儿喘息,但在致重症肺炎和重症哮喘发作方面具有相同毒力;2岁以下儿童中,HRV-A感染引起重症肺炎可能与病毒高载量有关。第二部2012-2014年重庆地区肠道病毒D68在呼吸道感染住院患儿中的分子流行病学研究背景及目的:人肠道病毒D68 (Human enterovirus-D68, HEV-D68)属于肠道病毒D组,是罕见病毒,偶可引起呼吸系统感染。2014年8月HEV-D68在美国和加拿大爆发流行,导致严重的呼吸道疾病。重庆地区呼吸道感染病毒监测平台发现HEV-D68在2014年9月和10月较以往明显升高,这一升高趋势与北美洲的爆发相一致。本研究对重庆地区HEV-D68分离株的临床特征和基因特点进行分析。方法:收集2012年1月到2014年11月在重庆医科大学附属儿童医院呼吸中心呼吸道感染住院患儿的鼻咽抽吸物(nasopharyngeal aspirate, NPA)标本,采用多种PCR方法对常见呼吸道病毒进行检测,HEV-D68阳性的标本经PCR方法扩增全基因组序列,与GenBank中收录的HEV-D68基因序列进行进化树分析。结果:1876份NPA标本中检出HEV 26份(1.4%),其中HEV-D6819份(1.0%,19/1876),2014年9月和10月,IEV-D68 阳性率为9.8%(13/132)。VPl基因系统发育树分析表明19例HEV-D68属于A和B两个亚型,且2014年9月和10月的13株分离株均属于B亚型。全基因组系统发育树分析表明本研究HEV-D68分离株与2014年美国爆发的主要流行株高度同源。5’UTR序列比对分析发现B亚型存在2个碱基片段缺失,为681-703和717-728。19例HEV-D68检出患儿,13例(68.4%)患儿既往有反复喘息病史,13例(68.4%)患儿诊断为哮喘,其中11例为哮喘急性发作(重度:5例,中度:6例)。HEV-D68单独检出有8例,单独检出组诊断为哮喘的患儿较混合检出组多(100%vs.45.5%,P=0.018)。与2012年和2013年的9月和10月比较发现,2014年9月和10月HEV-D68为哮喘急性发作住院患儿的主要病原体。结论:重庆地区流行的HEV-D68主要为A和B亚型,在2014年9月和10月,B亚型出现升高流行;既往反复喘息病史是儿童感染HEV-D68的危险因素,诱发哮喘急性发作是HEV-D68的一个临床特点。