目的:构建一种采用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)富集血清中外泌体并进行分离的方法,并进行血清外泌体中乳腺癌相关microRNA标记的检测分析。方法:分别采用PEG8000、商品化EXOQuick试剂盒试剂盒以及超速离心法富集血清外泌体。采用透射电子显微镜和NanoSight NS90法对分离得到的外泌体的粒径进行检测。蛋白质印迹法比较3种方法获得的血清外泌体表面标志物CD9表达的丰度;实时荧光定量PCR法检测乳腺癌、乳腺良性病变及正常健康人血清和血清外泌体中微RNA-21(microRNA-21,miR-21)的表达趋势。结果:本研究构建获得的PEG分离外泌体的方法,在粒径分布和外泌体表面标志物CD9表达丰度方面,优于超速离心法,与商品化的EXOQuick试剂盒效果相当。PEG法富集获得的乳腺癌患者血清外泌体中miR-21的表达水平较乳腺良性病变明显上调(P=0.024),上调倍数为2.68倍;而直接从血清中检测miR-21在乳腺疾病患者血清中表达水平的结果显示,乳腺癌患者和乳腺良性病变患者基本没有变化。结论:本研究构建的外泌体富集试剂及其方法,操作简便、耗时短、成本低。与直接检测血清中miRNA的表达水平相比,可明显增加检测效率。