论文部分内容阅读
肝纤维化是肝脏对各种慢性肝损伤的创伤修复反应,是肝炎病毒、药物等各种致病因子导致的一种慢性炎症性疾病,以胶原为主要成分的细胞外基质的大量沉积为主要特点,肝星状细胞的活化在肝纤维化的发生及进展中扮演着重要的角色,促进活化的HSC凋亡是防治肝纤维化的重要有效手段。内质网应激表现为内质网腔内错误折叠与未折叠蛋白聚集以及钙离子平衡紊乱,可激活未折叠蛋白反应、内质网超负荷反应和Caspase-12介导的凋亡通路等信号途径,既能诱导葡萄糖调节蛋白GRP78等内质网分子伴侣表达而产生保护效应,亦能独立地诱导细胞凋亡,可直接影响应激细胞的转归,如适应、损伤或凋亡。内质网应激在肝纤维化的发生发展中具有重要作用,内质网应激诱导剂TG能够显著促进活化的HSC凋亡,促进肝纤维化的逆转恢复。川芎嗪是活血化淤中药川芎中的一种生物碱,化学结构为四甲基吡嗪,被广泛地用于治疗临床各种心脑血管病、慢性阻塞性肺病等。大量研究表明川芎嗪具有肝脏保护作用,川芎嗪可以促进肝星状细胞凋亡,进而发生抗肝纤维化效应。那么川芎嗪诱导肝星状细胞凋亡是否与内质网应激有关?为此本研究在细胞水平上探讨川芎嗪是否诱导HSC细胞发生内质网应激及相关凋亡,进一步阐明川芎嗪抗肝纤维化的相关机制,为肝纤维化的逆转提供新的思路。目的:研究川芎嗪对大鼠肝星状细胞凋亡的影响及机制研究,为肝纤维化的治疗提供新的方法。方法:以血小板衍生生长因子(PDGF-BB)刺激大鼠肝星状细胞系HSC-T6,建立体外肝纤维化细胞模型,在此基础上,给予川芎嗪(30μmol/L)刺激HSC-T6,作用24h后,western blot检测相关蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Hoechst 33258染色法观察各组HSC的凋亡形态。结果:western blot结果表明,较PDGF组,川芎嗪组肝纤维化相关蛋白α-SMA及Col-1表达减少。流式细胞仪检测结果表明PDGF+川芎嗪组较PDGF组HSC凋亡率增强,同时Hoechst 33258染色表明PDGF+川芎嗪组HSC呈现典型的核固缩等凋亡形态变化。此外PDGF+川芎嗪组ERS标志性蛋白GRP78表达增多,并且ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12表达增强,Bcl-2/Bax比例明显下调,p-ERK/ERK水平降低。结论:川芎嗪可以诱导PDGF活化的HSC发生凋亡,其可能与ERS特异性凋亡蛋白CHOP及C-Caspase12的表达上调、ERK1/2磷酸化水平降低,进而下调Bcl-2/Bax比例,发生相关凋亡。