上世纪五十年代以来,苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫剂因毒力高、杀虫快、不杀天敌和有益微生物、不破坏生态平衡、具有适应大规模发酵生产、低成本等优点,苏云金芽孢杆菌已成为世界上应用最广泛的微生物杀虫剂。然而,随着苏云金芽孢杆菌杀虫剂长期大量使用,发现全世界范围内多种昆虫都对其产生了抗性,这些抗性均呈现递增的趋势。因此阐明抗性形成和发展规律揭示抗性的分子机制是治理好昆虫对Bt抗性的关键问题。本实验室长期致力于这方面的研究,尤其是针对粉纹夜蛾BTI-Tn-581-4细胞对CrylAc毒素产生高水平抗性的机理做了大量的研究工作,并从蛋白质组水平探讨抗性产生的分子机制,采用双向电泳技术分离了敏感和抗性两种细胞的总蛋白和总膜蛋白,银染显色,Melanie ViewerⅡ软件分析,获得了一些差异蛋白质,对部分差异蛋白质点测定了肽质量指纹图谱(peptide mass fingerprint,简称PMF)并查询了蛋白质数据库。经数据库查询,初步鉴定差异蛋白质为一些与胞质外周蛋白,脂多糖生物合成蛋白和免疫球蛋白重链等具同源性的蛋白质。在前人工作如毒力测定、抗性筛选和稳定以及在转录组和蛋白质组水平研究了敏感与抗性两种细胞的基因差异表达,并初步鉴定了一些差异表达基因或差异蛋白质的基础上,本实验采用双向电泳技术分离了敏感和抗性两种细胞的总蛋白,银染显色,ImageMaster 2D Platinum 6.0软件分析,统计了凝胶上所有的差异蛋白点,并初步分析量的差异。分别以粉纹夜蛾细胞BTI-Tn-5B1-4细胞总蛋白双向电泳图谱和粉纹夜蛾抗CrylAC的BTI-Tn-581-4细胞总蛋白双向电泳图谱为参照,在抗性细胞的2-DE总蛋白图谱上检测到的差异点有209个,其中表达量上调2-3倍的有17个,表达量上调3倍以上的有18个,这里面表达量上调5倍以上的有4个;表达量下调2-3倍的有13个,下调3倍以上的有7个,其余各点均为Hi5图上有而L123图上消失的点;在敏感细胞的总蛋白2-DE图谱上检测到的差异点有214个,其中表达量上调2-3倍的有19个,上调3倍以上的有10个,这里面有3个上调5倍以上;下调2-3倍有17个,下调3倍以上有28个,这里面有12个下调5倍以上。其余各点均为L123图上有而Hi5图上消失的点。其中分辨率高重复性较良好的显著差异点有11个。这些差异蛋白质可能与抗性的产生存在直接或间接的关系。