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目的：p53信号通路是一条对胚胎发育和细胞生长增殖有重要作用的信号传导通路,p53基因的突变是肿瘤发生发展中最常见的遗传学改变。人类50％以上的肿瘤组织中发现p53基因的突变。在鼻咽癌中p53经常过表达,而其基因的突变罕见。有报道认为p53通路的调节蛋白mdm2、p53的同源物p63及EB病毒编码产物可能与p53的功能失活有关。EZH2(果蝇zeste基因增强子同源物2)是机体表观遗传学的重要调控因子,可以介导抑癌基因的甲基化沉默,并参与细胞增殖,已发现EZH2的过表达与多种恶性肿瘤及其预后相关。近来有研究表明p53基因对EZH2的表达有一定的调控作用。为进一步了解在鼻咽癌中p53的功能失活的因为及其EZH2表达的关系,我们应用免疫组化技术检测47例鼻咽癌石蜡标本中p53、mdm2、p63、Ki67和EZH2的蛋白水平,以慢性鼻咽炎症组织石蜡标本为对照。通过观察上述因子在鼻咽癌中水平表达,并结合相关临床资料,分析其在鼻咽癌中表达的特点,以及在鼻咽癌的发病机制中的作用,为鼻咽癌病因学及其治疗的潜在研究方向提供理论依据。
方法：⑴选取47例2001年11月至2002年12月间中山市人民医院病理确诊鼻咽癌石蜡切片标本,均为首诊取鼻咽组织活检,经HE染色确诊为鼻咽未分化癌。其中男性34例,女性13例,平均年龄46.7岁(27～73岁)。根据2002年UICC分期标准,由患者Ct检查及住院资料确定,临床分期Ⅰ期0例、Ⅱ期16、Ⅲ期24、Ⅳ期7例(包括4例远处转移者)。⑵12例慢性鼻咽炎症石蜡切片标本为2005年9月至2006年10月门诊病理活检标本,由HE染色确诊为慢性鼻咽炎症。⑶采用免疫组化二步法检测p53、mdm2、p63、Ki67和EZH2在12例慢性鼻咽炎症组织和47例鼻咽未分化癌中的表达,结果用SPSS13.0软件进行统计分析,统计涉及卡方检验、t检验,Pearson相关及Kaplan-Meier法生存率分析(log-rank检验),检验水准α=0.05,以P<0.05为差异有统计学意义。
结果：①p53、mdm2、p63、Ki67及EZH2蛋白在47例鼻咽癌的表达的阳性率及平均阳性积分分别是：p53(85.1％,41.6％)、mdm2(31.9％,-)、p63(95.7％,47.4％)、Ki67(63.8％,18.8％)及EZH2(100％,72.9％)。p53与p63的表达呈正相关,而p53与mdm2的表达无关。p53、mdm2在鼻咽癌中的表达与患者的年龄、性别、原发灶大小(T分期)、淋巴转移、临床分期均无关系。EZH2、p63、Ki67的表达与原发灶大小(T分期)及临床分期有关。②EZH2蛋白在正常鼻咽粘膜中存在表达,在假复层纤毛柱状上皮(癌性标本和慢性鼻咽炎症组织的正常上皮)主要表达于基底细胞层和上基底细胞层,阳性细胞表达从基底层到棘细胞层逐渐减少。在鼻咽癌的间质组织及鼻咽慢性炎症组织淋巴小结生发中心的部分淋巴细胞中也呈阳性表达。EZH2在47例鼻咽癌标本高表达与临床分期升高和不良预后相关。2例癌性标本癌旁组织EZH2的阳性表达,可能标志着致瘤性转化前的表观遗传学改变。③EZH2与p63、Ki67的表达呈正相关,三者在鼻咽癌中的阳性细胞表达范围EZH2>p63>Ki67。三者高表达均可作为不良预后的指标。但统计分析显示只有EZH2的不同表达水平差异有统计学意义。
结论：⑴本研究在47例鼻咽癌中未发现p53与mdm2、EZH2蛋白表达的关系。p63与p53的表达呈正相关,p63的过表达可能与p53功能失活的有关。⑵EZH2在正常鼻咽上皮细胞中的表达,可能反映细胞的增殖性及分化状态；其在肿瘤组织中高表达可能与恶性侵袭性相关；EZH2表达不受p53、p63活性状态的影响；癌旁组织EZH2的表达,可能标志着致瘤性转化前的表观遗传学的改变。⑶EZH2与p63、Ki67均是有细胞增殖有关的细胞因子,本研究中三者表达呈正相关,在鼻咽癌中的阳性表达率及阳性细胞表达范围:EZH2>p63>Ki67。EZH2高表达均可作为肿瘤进展及不良预后的新指标。