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硒是人体必需的微量元素,且有利于植物生长发育及提高品质。但目前对硒施用于植物的研究主要集中于粮食及经济作物,对药用植物,尤其对三七鲜有报道。三七是第一批通过国家GAP认证的中药材品种之一,具有止血和补血双向功效。云南省是三七主要种植区,其种植地土壤硒含量低于全国土壤硒含量均值(0.29 mg/kg)。植物中硒主要从土壤中获取,云南三七种植土壤硒含量不足,导致三七硒含量偏低,对三七生长、药效成分累积产生了巨大的影响。因此,通过大田调查、水培及盆栽试验,系统研究三七对硒的生理响应特征,揭示相关吸收转运规律,探明硒对三七素及皂苷含量的影响。本研究主要成果如下:1.通过对云南省18个三七种植区三七-土壤硒及三七素含量调查,明确其与三七素含量的关系;通过硒酸钠和亚硒酸钠(0-30μM)水培处理,研究二年生三七生理及三七素含量的变化,明确硒处理对三七抗逆胁迫能力及三七素含量影响及机理,探讨适合三七生长发育的硒的价态。结果表明,云南省18个三七种植区土壤及主根硒含量分别为0.16-0.32 mg/kg,0.21-1.18 mg/kg,三七素含量为0.69%-0.98%,种植地三七和土壤中硒含量均低于全国平均水平。三七素含量与土壤硒及植物中硒含量均呈极显著正相关(R2=0.19**,R2=0.31***,p<0.01)。水培试验表明低浓度硒(≤2μM)处理显著提高三七抗氧化能力,提高抗逆境胁迫信号物质NO和H2O2的含量,减少丙二醛(MDA)含量,亚硒酸钠和硒酸钠处理下三七素含量分别增加157.58%-165.04%和156.51%-181.61%。但高浓度(10μM)硒处理导致过量活性氧物质的生成,并导致三七素含量降低。2μM亚硒酸钠处理下三七ASA含量显著高于CK,而各浓度硒酸钠处理间ASA含量均无显著差异;且亚硒酸钠处理下地下部硒含量高于地上部,而硒酸钠处理则反之。综上,土壤硒可能是三七素形成的重要矿质元素,适当补硒有利于提高三七抗氧化能力和三七素含量,亚硒酸钠处理对提高三七抗氧化效果优于硒酸钠,亦更有利于硒在三七根部的累积。2.通过盆栽试验,研究了不同浓度亚硒酸钠(0-10 mg/kg)叶面喷施对二年生及三年生三七农艺性状和光合特性影响,抗氧化系统及三七素和皂苷含量的变化规律。结果表明,5 mg/kg亚硒酸钠处理促进三七叶宽、叶长、叶柄长、株高和茎粗增长,提高叶片SPAD值,光合参数(Pn、Ci、Tr)和叶绿素荧光参数Fv/Fm,降低气孔导度Gs,从而促进三七生物量上升;5 mg/kg硒处理增强三七SOD、POD和CAT活性,提高GSH和ASA含量,降低MDA含量;随着亚硒酸钠处理浓度的升高,三七根部硒累积量和三七素含量也随之增加。5mg/kg硒处理显著提高二年生三七单体皂苷含量,但随着处理浓度的升高(10mg/kg),皂苷含量则随之降低,同时伴随叶面局部黄化;而三年生三七在1mg/kg硒处理下皂苷含量最高,超过5 mg/kg浓度处理叶面开始泛黄。综上,低浓度亚硒酸钠处理促进三七生长及光合作用,提高产量,增强抗氧化作用,高浓度亚硒酸钠处理虽然有利于硒含量及根部三七素累积但会对上述指标产生抑制作用,二年生与三年生三七对亚硒酸钠处理响应存在农艺性状及皂苷含量差异。因此,在生产中应选取适当浓度亚硒酸钠叶面喷施。3.通过水培实验,研究了不同浓度三七素(0-50μM)对二年生三七根系活力、抗氧化系统、活性氧含量的影响,旨在探明三七素是否参与三七抗氧化作用。结果表明30μM三七素处理提高根系活力,增强抗氧化酶活性,提高非酶物质含量,从而降低活性氧含量,缓解膜质过氧化伤害;高浓度(50μM)三七素则对三七产生胁迫作用,导致活性氧含量增加,根系活力下降,降低三七的抗氧化作用。综上所述,三七素参与三七的抗氧化酶活性调节,提高其抗氧化能力,降低细胞膜脂质过氧化损伤,使三七保持低活性氧水平,避免三七遭受自由基毒害。4.通过水培试验研究了硒(2μM亚硒酸钠)与硫(0-4 mM七水硫酸镁)互作对二年生三七抗氧化酶系统的影响,并对三七素、皂苷含量及相应合成酶基因表达量进行了研究,旨在明确硒硫互作对三七抗氧化系统的调控作用,并揭示硫对硒调控三七素合成的影响。结果表明,硒、硫单独处理均增强三七抗氧化酶活性,提高非酶物质含量,以清除活性氧,降低MDA含量。硒能够缓解高浓度硫处理导致的活性氧伤害,硫抑制三七对硒的累积并提高三七地上部的皂苷含量。除Se2、Se2S2和Se2S4处理下三七的硒含量,其余处理下三七硒含量均低于CK。硒硫互作促进三七素累积,但响应浓度不一,三七素含量在Se2处理下最高,硫单独处理下三七素含量虽高于CK,但低于相应的硒硫联合处理。硒硫互作促进三七素合成途径关键酶基因CAS及SAT上调,CS基因下调的结果与三七素含量变化一致。综上,硒单独处理增强三七的抗氧化能力,促使CAS及SAT上调,CS基因下调,提高三七素含量的效果优于硫单独处理和硒硫联合处理,说明硒可增强硫在三七中发挥抗氧化作用及提高三七素含量。因此,根据实际需求,建议生产中增施硒肥代替硫肥在三七中施用。