研究背景:胃癌（Gastric cancer,GC）和结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）胃肠道常见恶性肿瘤,具有高发病率和高死亡率。肿瘤微环境在肿瘤发生发展中起重要作用,其中,肿瘤相关成纤维细胞（Cancer-associated Fibroblasts,CAFs）强大的分泌功能与肿瘤细胞双向诱导,是肿瘤恶化的主要推手。由于CAFs在肿瘤细胞能量代谢、干性重塑以及化疗耐药等方面的重要作用,CAFs已成为肿瘤治疗的新靶点。故探讨CAFs的作用机制,是目前肿瘤研究的重要领域和重大热点。烟酰胺N-甲基转移酶（Nicotinamide N-methyltransferase,NNMT）,在多种肿瘤组织中高表达,可催化烟酰胺N-甲基化,通过耗竭甲基化底物SAM（S-5′-adenosyl-L-methionine）而改变蛋白质的甲基化程度,造成细胞低甲基化,促进肿瘤形成。卵巢癌相关研究发现,CAFs表达的NNMT是卵巢癌主要代谢调节器,对肿瘤发展有重要调控作用。NNMT可作为胃癌和结直肠癌的预后标志物。但基质NNMT与胃癌的关系尚未见文献报道,与免疫细胞浸润的关系亦未见详细探讨。POSTN是一种多功能分泌蛋白,可由肿瘤细胞和间质细胞合成,在肿瘤细胞的上皮-间质转化和干性重塑等方面具有重要作用。但是,在CRC组织中,核酸原位杂交分析显示:POSTN m RNA仅存在于CAFs;CRC组织中的POSTN阳性CAFs与CRC晚期疾病相关,且能够指示患者的不良预后。研究发现POSTN阳性CAFs能促进CRC细胞的增殖和转移,对CRC的生长和浸润有显著促进作用。但POSTN在肿瘤中存在多种异构体,其在结肠癌中的相关作用和机制尚未有报道。为研究胃肠道肿瘤中NNMT和POSTN阳性成纤维细胞的临床意义和生物学作用,本课题以成纤维细胞为核心,研究了成纤维细胞NNMT与胃癌患者的生存率和化疗及免疫细胞浸润的关系,以及研究成纤维细胞POSTN异构体对结肠癌增殖的影响。研究方法:第一部分:成纤维细胞NNMT高表达与胃癌患者生存预后的关系1)对来自上海长海医院的681例组织样本（包括612例癌症组织和69例对应的癌旁组织）进行免疫组化染色,分析NNMT蛋白表达。2)Kaplan-Meier分析NNMT与胃癌患者生存时间的关系。3)应用Cox回归分析影响胃癌患者生存时间的因素。4)Kaplan-Meier分析NNMT与化疗患者预后相关性。5)分析NNMT与免疫细胞的关系,探讨NNMT表达与免疫细胞浸润的关系。第二部分:结肠癌成纤维细胞中POSTN异构体对肿瘤细胞的作用1)设计共培养体系,将结肠癌细胞株RKO、SW480、CaCo2与成纤维细胞株CCD-18CO共培养诱导成纤维细胞POSTN表达,筛选表达水平有变化的POSTN异构体。2)Q-PCR检测成纤维细胞及临床样本中POSTN及其异构体m RNA的表达水平变化。3)选取异构体通过Tet-on质粒系统构建POSTN过表达质粒,通过慢病毒包装构建过表达质粒稳转株。4)平板克隆形成和CCK-8检测过表达POSTN异构体的成纤维细胞及其对结肠癌细胞增殖的影响。研究结果:第一部分:成纤维细胞NNMT高表达与胃癌患者生存率低相关1)从TCGA数据库下载的胃癌m RNA数据分析表明,NNMT在胃癌组织中高表达（P<0.05）。2)对胃癌CAFs中的NNMT与患者的年龄,性别,肿瘤大小和TNM分期等临床指标分析表明,NNMT与患者的TNM分期存在关联。3)应用Kaplan-Meier进行生存分析表明,CAF-NNMT高表达患者五年生存率明显降低。4)Cox分析表明,CAF-NNMT是影响胃癌患者生存时间的独立因素。5)应用Kaplan-Meier生存分析表明,CAF-NNMT高表达与胃癌患者化疗药物耐药相关。6)NNMT与胃癌免疫细胞浸润有关联。第二部分:结直肠癌成纤维细胞POSTN异构体对肿瘤细胞的调控作用1)结肠癌细胞诱导结肠成纤维细胞POSTN总m RNA表达升高。2)结肠癌细胞株诱导成纤维细胞POSTN异构体m RNA表达水平升高。3)结肠癌临床组织样本中POSTN及POSTN异构体m RNA表达水平升高。4)成纤维细胞POSTN异构体过表达对成纤维细胞无明显作用。5)成纤维细胞POSTN异构体hpn1、hpn2-3过表达促进CRC细胞增殖。研究结论:1)NNMT在胃癌相关成纤维细胞中高表达,与患者不良预后正相关,与化疗耐药性和免疫细胞浸润有关。2)结肠癌成纤维细胞和组织中POSTN总m RNA和POSTN异构体m RNA表达升高,过表达POSTN异构体对成纤维细胞无明显作用,hpn1和hpn2-3过表达均能促进CRC细胞增殖,hpn1能增强CRC细胞克隆形成能力。