具有免疫活性的（1→3）-β-D-葡聚糖是葡萄糖通过（1→3）-β-D-糖苷键连接而成的一类高分子化合物，广泛分布在细菌、酵母、蘑菇、真菌、谷物、海藻中。Saccharomyces cerviseae是重要的一类单细胞真菌，外被一坚硬的刚性细胞壁包围，（1→3）-β-D-葡聚糖是构成细胞壁的主要组分之一。（1→3）-β-D-葡聚糖通过与巨噬细胞、嗜中性粒细胞和NK细胞上的受体相互作用，诱导生物活性，提高宿主免疫功能，具有抗肿瘤和辐射保护作用，是哺乳动物、无脊椎动物的免疫促进物，还可用于治疗细菌、病毒、真菌和寄生虫引发的疾病。 S.cerevisiae FL1因具有较厚的细胞壁而被选择为（1→3）-β-D-葡聚糖的生产菌株。在液体YEPD培养基的生长，S.cerevisiae FL1最大比生长速率μ_max0.51h^-1，细胞倍增时间约1.34h。在利用单因素摇瓶实验考察营养和环境条件对S.cerevisiae FL1生物量影响的基础上，得到了较优的培养条件：8％（w／v）葡萄糖，4％（w／v）蛋白胨，1％（w／v）酵母浸提物，培养温度30℃，种龄5～8h，接种量2～4％（v／v），摇床转速220r／min，装液量30％（v／v）。随后，考虑到单因素试验设计的局限性，采用了响应面法对发酵培养基进行了优化。响应面法系数学与统计学的结合，它有助于快速建模、缩短优化时间和提高工程应用可信度。通过响应面法建立了S.cerevisiae FL1生物量与培养基组分蔗糖、硫酸铵及酵母浸出物浓度之间的函数关系 y=9.8634+1.0066x₁-0.2782x₂+2.3718x₃+0.3187x₁x₂+1.1812x₁x₃-0.1688x₂x₃,-0.2414x₁²-0.0735x₂²-1.0191x₃² 其中，x₁、x₂、x₃分别表示蔗糖、硫酸铵和酵母浸出物的编码值浓度。该模型与实际符合程度较高（R²=0.997）。变量分析揭示，在考察范围内，酵母浸出物对生物量收率影响程度最高，蔗糖次之，硫酸铵最弱。优化得到的发酵培养基为：115.5g／L蔗糖，10.0g/L硫酸铵，25.0g/L酵母浸出物，0.1g/L NaCl，0.1/LCaCl₂·2H₂O，0.5g/L MgSO₄·7H₂O，1.0/L KH₂SO₄。上罐发酵，S.cerevisiae FL1的最大生物量42.96g/L。 传统的（1→3）-β-D-葡聚糖制备方法是基于酸碱反复萃取，这种方法的明显不足在于酸、碱试剂用量大、产物杂质含量高、劳动强度大和环境污染大。本工作提出了使用次氯酸钠氧化S.cerevisiae FL1自溶细胞制备（1→3）-β-D-葡聚糖的思路。在考察了各种理化因素对细胞自溶率的影响后发现，52℃下，S.cerevisiae FL1暴露在1.5％（v／v）乙酸乙酯（pH5.5）溶液中，S.cerevisiae FL1自溶率达到最值。自溶36h后，自溶进行得比较彻底。而且与平衡期的S.cerevisiaeFL1细胞壁相比较，自溶细胞的细胞壁基本保持不变。利用自溶过程降解、去浙江大学博士学位论文除细胞内的大分子物质，继而使用稀次氯酸钠溶液氧化5. cerevisia。FLI自溶细胞制备真菌（l一3）一p一D一葡聚糖。借助于元素分析、红外吸收光谱技术和‘HNMR，得到的多糖系（l峥3）一p一D一葡聚糖。（1分3）一p一D一葡聚糖’H NMR谱图分辨率与温度相关，温度越高，谱图分辨率提高;（1分3）一p一D·葡聚糖的水溶性较差。 细胞在其自然栖息环境和工业培养过程如食品、制药工业、绿色化学合成、深海微生物学和有机相生物转化以及细胞固定化工程中，常常要忍受高盐、高糖渗透应激作用。为了揭示渗透作用机制，考察了氯化钠、山梨醇、甘油和聚乙二醇（PEG600）等4种化合物对模式生物5. cerevisiae细胞生长、形态结构和代谢的影响。24h细胞培养结果表明，渗透抑制作用随着渗透强度的增加一致加剧，抑制细胞比生长速率。当甘油浓度上升到4.52 mol/L时，细胞增殖完全被抑制。增加环境中甘油浓度能增加细胞平均体积，并随着甘油浓度的提高，L:B值趋近于1.18左右，细胞形状趋于球形，这减少了细胞的比表面积，有利于减少胞内水分的损失流量，从而保护了细胞。在生理可接受的渗透强度内，与对照组相比较，0.5 mo比氯化钠和0.33m。比PEG600不影响最终残糖水平和生物量浓度。5 cerevisiae FLI由于具有刚性的细胞壁能耐受低渗应激处理，尝试通过了低渗应激诱导5. cerevisiaeFLI合成（l峥3）一p一D一葡聚糖。与对照组，等渗环境的5. cerevista。FLI相比，低渗环境抑制了细胞壁的增长，但低渗、等渗交替作用对细胞壁的效应最明显。低渗应激处理40h后，细胞p一葡聚糖含量7.2%，而低渗、等渗交替作用40h后，细胞壁p一葡聚含量提高了18.1%。低渗、等渗交替作用能够刺激5. cerevisiaoFLI合成（1分3）一p一D一葡聚糖。 通过简化5. cerevisiaeFLI菌落形态和引入未饱和系数、渗透作用，得到了一个描述不同渗透环境下5. cerevisiae FLI在YEPD固体培养基上的增殖模型m（t）0 .00004lx0.006728加.000041“+（0.006728“一0.000041”）。一，聆其中，刀表示环境因子的效应。卢越大，环境越利于细胞的增殖，环境越友好;Z为适小，环境越不利于细胞的增殖，环境越恶劣。使用该模型，我们建立了一个定量描述不同渗透剂在不同浓度时的渗透抑制作用。对照组YEPD平板、o.smol几氯化钠、0.巧mol几甘油、o.smol/L氯化钠和。，15mol几甘油