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采用平板菌落计数法对克拉玛依原油污染土壤微生物进行群落计数,并在此基础上以降粘率及菌群增长率为依据,用单因素试验和正交试验考察了营养要素对菌群增长率及降粘率的作用;通过DNA产量、纯度、片段大小、基因组完整性等指标,比较三种DNA提取方法,从中得到一种操作简单、提取快速、适用于石油污染土壤微生物DNA模板制备的提取方法,以该方法为基础结合DGGE免培养的分子生物学方法对筛选出的激活剂进行初步评价,为克拉玛依内源微生物采油技术奠定基础。具体结果如下:(1)从5份克拉玛依原油污染土壤样品中均分离得到烃类降解菌、产甲烷菌、脱氮菌、硫酸盐还原菌、铁细菌、硫细菌六类细菌,它们都能够在贫营养状态下生长,培养36-60h达到生长的最大值,它们的混合菌生长最大值在24h,六类细菌及它们的混合菌对原油均有降粘作用,其中混合菌的降粘效果最佳,降粘率达7.90%。(2)针对有益于采油的三类细菌及不利于采油的三类细菌筛选出的最佳选择性激活剂配比为:0.80%的蔗糖,0.45%的硝酸钠,0.12%磷酸氢二钾或磷酸二氢钾,该激活剂能有效地、选择性地激活微生物的生长,在此条件下上述混合菌的降黏率可达46.0%。(3)运用3种DNA提取方法提取污染土壤的微生物DNA,对得到的DNA质量进行分析可知3种方法均能从石油污染土壤中提取得到相应的细菌DNA片段,且针对同一种提取方法,土壤理化性质的差异对DNA提取效果的影响不明显;但不同方法提取得到的DNA在浓度和纯度上存在明显差异;其中手提DNA法的操作简单、提取快速、DNA得率较高,提取的DNA量达98.3 ng/ul,可满足后续实验的要求。(4)结合DGGE的免培养分子生物学方法分析结果如下:激活后样品微生物群落结构发生明显变化,样品间微生物群落结构的相似性在53%-76%之间,高于激活前样品间微生物群落结构的相似性41%-61%,说明加入所筛选的激活剂能使一些因营养缺乏生长受抑制的细菌得以大量繁殖,选择性地激活部分微生物的生长。