目的本研究旨在获得适宜的茶多酚提取工艺路线，考察银茶复方成分体外实验的作用剂量，运用细胞形态学和凋亡学研究银茶复方成分抑制ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞凋亡，在蛋白和RNA水平上研究银茶复方成分抑制ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞炎症损伤。方法水提法提取茶多酚，酒石酸亚铁法检测水提液中茶多酚含量，根据单因素实验结果，采用响应面法设计四因素三水平实验优化提取工艺，HPLC检测茶多酚中EGCG、EGC和咖啡因的含量；采用CCK-8法测定各组药物不用剂量对细胞存活率的影响；吖啶橙荧光染色观察人脐静脉内皮细胞的形态学变化；Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测人脐静脉内皮细胞凋亡率；Elisa检测各组药物对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞表达炎症因子VCAM-1、ICAM-1、MCAP-1、E-selectin蛋白的影响；qRT-PCR检测各组药物对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞VCAM-1、ICAM-1、MCP-1、E-selectin、NF-κB p50、NF-κB p65mRNA表达的影响。结果1.响应面优化水提茶多酚工艺结果显示：当料液比为1：20，温度60℃，时间60min，提取次数3次，茶多酚提取率最高，达31.85%；HPLC检测水提茶多酚中EGCG、EGC、咖啡因的含量分别为41.98%、8.51%、0.13%；2. CCK-8法检测结果表明不同浓度的茶多酚、银杏叶提取物、银茶复方、辛伐他汀对细胞存活率呈现不同程度的影响，药物作用浓度低，细胞存活率越高，最终选择茶多酚20μg/ml、银杏叶提取物20μg/ml、银茶复方20μg/ml、辛伐他汀6.25μg/ml研究对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞损伤的抑制作用；3.吖啶橙荧光染色法结果显示：模型组即ox-LDL组出现细胞变小变圆，胞核皱缩，染色质浓缩等现象；正常对照组细胞形态完整，细胞生长状态旺盛；单独用药茶多酚和银杏叶提取物预处理后加ox-LDL损伤的细胞形态出现部分细胞呈细胞变小变圆，胞核皱缩，染色质浓缩等现象；银茶复方组细胞形态完整，具有良好的生长状态，细胞形态比单独用药茶多酚或银杏叶提取物完整。流式细胞检测技术检测细胞凋亡率的结果进一步证实形态学检测结果。4. Elisa和qRT-PCR法结果显示模型组即ox-LDL组细胞中与动脉粥样硬化发生发展相关的重要炎症因子VCAM-1、ICAM-1、MCAP-1、E-selectin、NF-κB p50、NF-κB p65都有大量表达，正常对照组细胞中表达量低，两组相比有显著性差异（P<0.05），单独用药茶多酚抑制炎症因子表达的作用强于银杏叶提取物，二者配伍制成的银茶复方抑制作用显著强于单独用药组（P<0.05）。结论1.响应面优化水提结果理想，茶多酚得率接近32%，茶多酚中EGCG含量达40%、咖啡因含量低于1%，对于实际应用具有一定参考价值；2. ox-LDL成功诱导人脐静脉内皮细胞凋亡，银茶复方成分能够抑制ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞形态变化、细胞凋亡；3.银茶复方成分能减少与动脉粥样硬化发生发展相关主要细胞炎症因子的表达，复方的抑制损伤效果明显优于单独用药，且复方中起主要作用的成分是茶多酚。