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为了研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)F蛋白（alternate readingframeshifting protein, ARFP）在HCV慢性感染以及HCV相关肝癌发生过程中的作用及意义，本实验以HCV慢性患者（chronic hepatitis patient, CHP）和HCV相关肝细胞癌患者（hepatocellular carcinoma patient, HCCP）外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）为研究对象，了解HCV1b-F蛋白体外刺激CHP和HCCP PBMC后IFN-γ和IL-5的表达情况，分析了F蛋白在体外对宿主细胞Th1/Th2细胞因子表达的影响，以期发现F蛋白在HCV慢性化进程和HCV相关肝癌发生中可能扮演的角色；我们还检测了不同年龄和病程HCV患者血清中F抗体(F antibody, F-Ab)水平，以期进一步探讨F蛋白在HCV生命活动中起到的作用。方法：（1）提取带有F基因片段的pEGFPC3-F重组质粒，用BamH I和EcoR I双酶切，电泳回收后与用上述双酶切割并电泳回收的pColdⅡ质粒连接，获得的重组质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞，筛选阳性转化子后提取质粒，进行酶切鉴定并测序。（2）将HCV1b-F::pcold Ⅱ/BL21重组菌大量培养后加IPTG诱导表达，菌体沉淀用Binding buffer溶解，冰上超声破碎，离心后取上清，上镍柱，Elution buffer洗脱，收集洗脱下来的蛋白溶液，透析复性，将复性后的F蛋白进行蛋白浓度测定、SDS-PAGE电泳以及氨基酸测序鉴定。（3）将纯化后的重组表达蛋白HCV1b-F蛋白作为抗原包被酶联反应板，以待测HCV患者血清标本为一抗，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体为二抗，以F蛋白孔作为本底对照，ELISA分别检测40份慢性HCV患者和20份HCV相关肝癌患者血清，依据所测F抗体的阴性或阳性结果，并将HCV患者分成四组，即F-Ab(+)CHP、F-Ab(-)CHP、F-Ab(+)HCCP和F-Ab(-) HCCP组。（4）分离培养健康者和HCV患者PBMC，加入去除内毒素的F蛋白处理细胞，72h后收集细胞上清，ELISA检测IL-5和IFN-γ的浓度。结果：（1）酶切鉴定结果显示与目的基因片段大小一致，提取重组质粒进行DNA序列测定与比对分析，结果证实DNA插入序列正确；（2）将洗脱下来的蛋白溶液透析复性后，收集透析膜内的蛋白溶液，进行SDS-PAGE鉴定，结果显示：重组菌特异性表达产物的分子量约为18kD，符合预期；经紫外分光光度计测定，复性后的蛋白浓度为0.94mg/ml；通过测定蛋白的氨基酸序列，进一步证实该蛋白即为HCV1b-F蛋白。（3）用F蛋白检测HCV患者血清标本，发现22份慢性HCV患者血清F抗体检测呈阳性（阳性率为55%），12份HCV肝癌患者血清F抗体检测呈阳性（阳性率60%）。（4）ELISA检测结果经SPSS软件分析后显示，F-Ab(+) CHP组IL-5的水平高于F-Ab(-) CHP组（P<0.05），其IFN-γ的水平低于F-Ab(-)CHP组（P<0.05）；F-Ab(+)HCCP组IL-5水平高于F-Ab(-) HCCP组（P<0.05），其IFN-γ的水平低于F-Ab(-)HCCP组（P<0.05）。结论：HCV1b-F蛋白体外刺激HCV患者PBMC，ELISA结果显示该F蛋白可能上调IL-5水平而下调IFN-γ水平，可能与HCV慢性化和肝癌发生机制有关。