论文部分内容阅读
海藻糖是具有抗氧化功能和非渗透性冷冻保护功能的双糖。目前被广泛应用于细胞和精液的冷冻中。但其作用机制仍未完全阐明,本试验通过探究不同浓度的海藻糖,不同降温速度,海藻糖和甘油的不同组合方式对绒山羊精液冷冻的影响。同时利用代谢组学从代谢物层面分析海藻糖对精子冷冻保存的影响,探究海藻糖对内蒙古绒山羊精子冷冻保存的作用机制。本研究主要获得以下结果:1.比较了不同降温速度对内蒙古绒山羊精液冷冻保存的影响,与传统的Tris-柠檬酸-葡萄糖(TCG)稀释液相比,在绒山羊精液冷冻稀释液中添加海藻糖,精子最佳降温速度为0.16℃/min,精子冷冻解冻后的活力达到58.3%。而使用TCG时的降温速度在0.2-0.25℃/min之间时,精子活力最高,达到56.1%。因此,当添加海藻糖进行绒山羊精液冷冻时,应使用较慢的速度进行降温,当降温速度保持在0.16℃/min时,内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果最好。2.比较了海藻糖和甘油的不同组合方式对绒山羊精液冷冻解冻后的活力、精子结构、抗氧化性能的影响。0 mM(T0)、50 mM(T50)的海藻糖和0%(G0)、1%(G1)、2%(G2)、3%(G3)的甘油分别组合为 T0G0、T0G1、T0G2、T0G3、T50G0、T50GJ、T50G2和T50G3。在TCG稀释液作为基础液时,海藻糖和甘油联合使用,通过协同作用提高了精子冷冻保存效果,其发挥作用的最适浓度为50 mM海藻糖和1%甘油。精液冷冻解冻后的精子活力、顶体质膜完整率和抗氧化性能均显著高于其他组别(P<0.05)。3.利用代谢组学分析添加海藻糖和未添加海藻糖的稀释液对绒山羊精液冷冻保存的影响。对两组冷冻-解冻后精浆进行代谢物检测,结果显示,共检测到309种代谢物,其中上调差异代谢物有242种,下调代谢物有27种。利用变量权重值(VIP)进一步筛选到126种差异代谢物,代谢物之间彼此存在着相关性。其中13种代谢物可以作为潜在生物标记物,有10种潜在生物标记物在海藻糖组中表达,有3种潜在生物标记物在非海藻糖组中表达。通过代谢组层面可以证明海藻糖通过降低ROS水平,抑制精子提前获能等方式减少精子在冷冻过程中受到的损伤。