“人类肝脏蛋白质组计划”(简称HLPP)是我国科学家牵头的重大国际协作项目。其中,人类肝脏蛋白抗体库的构建为高通量抗体芯片、蛋白质的生理功能及不同生理状态或病理状态下蛋白水平的量变等研究提供了基础。因此,制备高特异性并具有良好市场前景的抗体,发现一批与肝炎、肝癌等重大肝病相关的分子标志、药物靶标以及重要蛋白药物是HLPP下一阶段研究的重点。 作为HLPP抗体库建设的组成部分,本实验室自制及北京华大提供的单克隆抗体共46株,效价达10-6以上的占76％,IgG类占93.5％。通过抗原信息库的建立和分析,26种抗原蛋白的类型包括各种酶、调节蛋白、信号转导蛋白、分子伴侣等,功能未知的蛋白3个。其中,有11个蛋白可能与癌症具有相关性,新近发现的肿瘤相关蛋白037(HLJl)和G80(HCA59)是本研究的重点。 利用制备的单抗,本研究对人胎肝组织石蜡切片进行了免疫组织化学染色,并取得了良好的染色效果,阳性率达到58％,为肿瘤标志物的组织学水平鉴定提供了良好的实验基础。此外,本研究以一株抗SOD2,且免疫组化染色阳性的单抗,进行了组织芯片技术鉴定抗原与肿瘤相关性的初步研究。实验结果表明,SOD2在各种肿瘤组织有广泛的表达,并且在直肠癌和肺癌中的表达量明显高于癌旁组织。采用免疫组化和组织芯片技术相结合,对肿瘤标志物在组织学水平上的鉴定,是我们今后的主要研究方向之一。 本研究还针对肿瘤相关蛋白HLJ1和HCA59,分别建立了双抗体夹心ELISA检测抗原的体系。检测体系的灵敏度分别达到15ng/mL和24ng/mL,并且具有良好的特异性和线性范围,可用于快速、灵敏地检测血清中的抗原含量,为肿瘤标志物的血清学水平鉴定提供了实验条件和基础。 总之,本研究建立了免疫组化及双抗体夹心ELISA检测抗原的方法,为进一步在组织学和血清学水平上对抗原的表达情况进行检测提供了有力的工具,并为肝癌标志物方面的研究打下良好的基础。