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目的:阐明线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导肺泡巨噬细胞(NR8383)炎症反应的放大作用,转染TLR9 siRNA后能抑制线粒体DNA的放大作用,并探讨线粒体DNA对LPS诱导肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法:1)用线粒体DNA试剂盒提取mtDNA,并通过琼脂糖凝胶电泳检测所提取的mtDNA纯度。2)采用不同浓度梯度的mtDNA干预LPS诱导的肺泡巨噬细胞(NR8383),将实验分组为Control组、LPS组、0.25μg/ml mtDNA+LPS组、0.5μg/ml mtDNA+LPS组、1μg/ml mtDNA+LPS组。LPS的终浓度为0.5μg/ml,24h后收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测炎症因子TNF-α的含量,明确mtDNA放大LPS诱导肺泡巨噬细胞炎症作用及mtDNA最适浓度。3)体外50nM的TLR9siRNA转染细胞48h,采用RT-qPCR检测肺泡巨噬细胞中TLR9 mRNA的表达,明确TLR9沉默效果。4)将实验分为七组,Normal组、Normal+siRNA-NC组、LPS组、mtDNA组、LPS+mtDNA组、siRNA-NC+LPS+mtDNA组、TLR9siRNA+LPS+mtDNA组。转染48小时结束后,加入上述浓度的mtDNA及LPS刺激NR8383。24h后分别收集细胞和细胞上清液,采用ELISA检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量;采用免疫荧光检测细胞NF-kB核移位情况;Western Blot检测MyD88、NF-kBp65表达情况。结果:1)琼脂糖凝胶电泳可以看到单一条带的mtDNA,分子量大约为16.5Kb。2)mtDNA能放大LPS致炎作用,mtDNA对LPS的放大作用成浓度依赖性,并在0.5μg/ml时致炎效果最佳。3)TLR9表达下调,表明转染成功。4)与LPS组相比,LPS+mtDNA组的TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高,NF-kB出现核移位,蛋白水平中MyD88及NF-kB p65表达升高,表明mtDNA能放大LPS的致炎作用;与LPS+mtDNA组相比,TLR9siRNA+LPS+mtDNA组能减轻上述的炎症反应,MyD88、NF-kBp65的表是发吧v达下降,表明下调TLR9能抑制mtDNA对LPS炎症放大作用。结论:1)mtDNA可以放大LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应;2)下调TLR9表达可以抑制mtDNA对LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应;3)mtDNA可能通过TLR9/MyD88/NF-Kb信号通路放大LPS对肺泡巨噬细胞的炎症反应。