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缺血性脑卒中是一种急性脑血管疾病,其发病率高,致死致残率高,严重危害着人类的生命健康。随着医疗技术和医疗设备的发展,脑卒中的治疗已经取得了巨大的飞跃,通过药物溶栓或机械取栓的方式再通血管的问题已得到初步解决,但血管再通后随之而来的缺血再灌注(I/R)损伤是不可避免的,并且严重制约着治疗的效果,影响患者的预后。脂联素(APN)是一种脂肪源性的血浆蛋白,研究表明,其在心肌缺血再灌注(I/R)损伤过程中有良好的治疗保护作用,而脂联素在脑缺血再灌注损伤过程中的保护作用及其相关机制尚有待进一步研究。本研究旨在探讨APN对脑I/R损伤的影响及其可能的相关分子机制。本研究以线栓法阻塞C57BL/6小鼠大脑中动脉作为卒中模型,阻塞一定时间后拔出栓线,以模拟脑缺血再灌注病理过程。外源性脂联素预处理实验小鼠,以探索脂联素对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其具体分子通路和作用机制。本研究将为脂联素在脑缺血再灌注损伤过程中的神经保护作用提供新的研究证据,并为临床应用脂联素干预缺血性卒中患者的预后提供新的理论基础。本研究共分为一项两部分:1.脂联素对小鼠脑缺血再灌注损伤后的保护作用。2.cAMP/PKA通路在脂联素脑保护效应中的作用及机制。第一部分脂联素对小鼠脑缺血再灌注损伤后的保护作用方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、I/R组、溶剂+I/R组和APN+I/R组。在大脑中动脉闭塞(MCAO)前24h给予APN处理3次(0h,12h,24h)。小鼠大脑中动脉阻塞2h后拔出栓线,进行脑组织血流再灌24h,以此模拟脑缺血再灌注损伤。再灌注24h后对小鼠进行脑梗死体积测量、神经功能评分、脑水含量测定,宏观评估脂联素的脑保护效应。以TUNEL染色法检测小鼠缺血半暗带脑组织(核心梗死区和正常脑组织之间的部分)的细胞凋亡情况。同时,再灌注24h后提取小鼠缺血半暗带脑组织,以Western blot法检测缺血半暗带脑组织中凋亡分子active caspase-3、Bax、Bcl-2的表达情况,以微观评估脂联素对缺血半暗带细胞凋亡的影响。结果1.与假手术组相比,脑缺血再灌注损伤组脑梗死体积、神经功能评分、脑水含量均增加。与溶剂+I/R组相比,APN+I/R组的脑梗死体积,神经功能评分,脑水含量均降低。2.与假手术组相比,脑缺血再灌注损伤组TUNEL染色阳性细胞增多。与溶剂+I/R组相比,APN+I/R组的TUNEL染色阳性细胞减少。与假手术组相比,脑缺血再灌注损伤组的促凋亡分子active caspase-3、Bax均升高,抑凋亡分子Bcl-2下降。与溶剂+I/R组相比,APN+I/R组的促凋亡分子active caspase-3、Bax均下降,抑凋亡分子Bcl-2升高。结论脂联素预处理能够减轻小鼠脑缺血再灌注后的损伤效应,并可有效抑制缺血半暗带的细胞凋亡。第二部分cAMP/PKA通路在脂联素脑保护效应中的作用及机制方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、I/R组、溶剂+I/R组和APN+I/R组。再灌注24h后取缺血半暗带脑组织,以Western blot法及免疫荧光法检测缺血半暗带脑组织中通路分子cAMP、PKA、CREB、BDNF的表达情况。而后将C57BL/6小鼠随机分为溶剂+I/R组、APN+I/R组、PKA激活剂+I/R组、PKA抑制剂+APN+I/R组。再灌注24h后取缺血半暗带脑组织,以Western blot法检测在PKA激动剂和PKA抑制剂作用条件下cAMP、PKA、CREB、BDNF的表达情况。再灌注24h后对小鼠进行脑梗死体积测量、神经功能评分、脑水含量测定,宏观评估PKA抑制剂对脂联素脑保护效应的影响。以TUNEL染色法检测小鼠缺血半暗带脑组织的细胞凋亡情况。同时,再灌注24h后提取小鼠缺血半暗带脑组织,以western blot法检测缺血半暗带脑组织中凋亡分子active caspase-3、Bax、Bcl-2的表达情况,微观评估PKA抑制剂对脂联素抑制缺血半暗带区域细胞凋亡效应的影响。结果1.与假手术组相比,脑缺血再灌注损伤后,缺血半暗带区域的cAMP、PKA、P-CREB/CREB、BDNF的表达下降。与溶剂+I/R组相比,APN+I/R组的cAMP、PKA、P-CREB/CREB、BDNF的表达升高。2.与溶剂+I/R组相比,APN+I/R组和PKA激活剂+I/R组的cAMP、PKA、P-CREB/CREB、BDNF的表达升高。与APN+I/R组相比,PKA抑制剂+APN+I/R组的cAMP、PKA、P-CREB/CREB、BDNF的表达下降。3.与溶剂+I/R组相比,APN+I/R组和PKA激活剂+I/R组的脑梗死体积、神经功能评分、脑水含量均下降。与APN+I/R组相比,PKA抑制剂+APN+I/R组的脑梗死体积,神经功能评分,脑水含量均升高。4.与溶剂+I/R组相比,APN+I/R组和PKA激活剂+I/R组的TUNEL染色阳性细胞减少。与APN+I/R组相比,PKA抑制剂+APN+I/R组的TUNEL染色阳性细胞增多。与溶剂+I/R组相比,APN+I/R组和PKA激活剂+I/R组的促凋亡分子active caspase-3、Bax均下降,抑凋亡分子Bcl-2升高。与APN+I/R组相比,PKA抑制剂+APN+I/R组的促凋亡分子active caspase-3、Bax均升高,抑凋亡分子Bcl-2下降。结论脂联素的脑保护效应可能是由cAMP/PKA-CREB-BDNF通路介导。