前言 乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤，近年来发病率呈直线上升的趋势，而且发病年龄趋于年轻化，远处转移是乳腺癌患者的主要死亡原因，因而倍受重视。PTEN基因是1997年由Steck等三个研究小组分别发现并命名的一种抑癌基因，定位于人类染色体10q23.3位点上，是迄今为止发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN基因作为抑癌基因调控细胞的生长发育和细胞凋亡，影响肿瘤细胞的浸润和转移，对细胞的信号转导和其它生物过程有着复杂而重要的作用。此外，普遍认为细胞凋亡是Caspase级联反应的结果，Caspase-3被证实处于该级联反应的下游，它通过降解细胞内相应底物使细胞死亡，与下游的Caspase成员成为凋亡事件的真正执行者。Caspase-3失活或表达减低与多种肿瘤的发生发展相关。目前关于PTEN蛋白与Caspase-3蛋白表达的改变与乳腺癌的发生、分化、生物学行为、预后等关系的研究报道较少，为探讨PTEN、Caspase-3在乳腺癌发生发展中的作用及二者间的关系，本研究采用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中PTEN蛋白与Caspase-3蛋白的表达，分析PTEN蛋白与Caspase-3蛋白表达与乳腺癌临床病理特征的关系及二者表达的相关性，旨在探讨二者在乳腺癌发生发展中的生物学意义及相关分子病理学机制。 材料与方法 1．临床病例资料存档乳腺癌石蜡标本95例，其中原位癌4例，早期浸润癌3例，浸润性特殊癌7例，浸润性非特殊癌81例，同时选取15例良性乳腺病变作为对照。乳腺癌患者术前均未做化疗、放疗及内分泌治疗，有完整的临床资料和随访资料。中位年龄44岁(22岁-74岁)，中位随访时间72个月。 2．实验方法和结果判定采用免疫组织化学方法检测上述乳腺癌及良性乳腺病变标本中PTEN蛋白(小鼠抗人PTEN单克隆抗体，工作浓度1：50，北京中山生物技术有限公司)与Caspase-3蛋白(兔抗人Caspase-3多克隆抗体，工作浓度1:100，D^KO公司)的表达。刊阻N蛋白以胞核或胞浆中出现清晰的棕黄色颗粒为阳性染色;Casp始e一3蛋白以胞浆中出现清晰的棕黄色颗粒为阳性染色。采用半定量积分法判断结果，每张切片随机选5个高倍视野观察，阳性细胞数<5%为0，5%一25%为1分，25%一50%为2分，50%一75%为3分，)75%为4分;阳性强度棕黄色为1分，金黄色为2分，棕褐色为3分，积分相乘，0分为阴性(一);l一6分为表达减低(+);8一12分为阳性(++)。生存分析中，将PIEN(+)、(++)归为P几N表达阳性组。 3.统计分析:采用SPSslZ.o软件包进行扩检验、Kendall等级相关、单因素生存分析、多因素生存分析。结果 对照组中均有抑癌基因m飞N编码蛋白的表达，棕褐色颗粒样物质定位于乳腺小叶导管上皮细胞和腺泡上皮细胞的胞质或胞核。95例乳腺癌组织中PTEN蛋白表达缺失者占33.7%(32/95)，表达减低者占52.6%(50/95)，阳性表达者占13.7%(13/95)。刊阻N蛋白位于癌细胞的胞质或胞核。经比较，PFEN在乳腺癌组织和对照组中表达差异有显著性(P<0.01)。 本组PTEN蛋白表达水平与TNM分期、组织学分级、腋窝淋巴结转移、治疗后局部复发及远处转移呈显著负相关(P<0.05)，与肿块大小、年龄均无明显相关性(P>0.05)。P几N蛋白表达缺失在TNMnl期、W期组(58.6%)显著高于TNMI期、n期组(22.7%)(P<0.05);Pl冤N蛋白表达缺失在组织学分级nI级(66.7%)显著高于I、n级(26.1%)(P<0.05);8例局部复发病例中6例PIEN蛋白缺失(75.0%)显著高于无局部复发组(29 .9%)(P<0 .05);4例远处转移病例P叹冤N蛋白均为表达缺失(100.O%)显著高于无远处转移组(30.8%)(P<0.05)。PrEN蛋白缺失表达在腋窝淋巴结转移组(37 .7%)高于无腋窝淋巴结转移组(28.6%)，但二者无统计学差异(p>0.05)。 Caspase一3蛋白定位于胞浆中。95例乳腺癌组织中CasPase一3蛋白缺失表达者占22.1%(21/95)，表达减低者占65.3%(62/95)，阳性表达者占12.6%(12/95)，显著低于良性乳腺病变阳性率86.7%(P<0.01)。Caspase一3蛋白表达除与TNM分期呈显著负相关外(P<0.01)，与其它乳腺癌临床病理生物学行为无明显相关性(P>0.05)。乳腺癌组织中PIEN蛋白表达与CasPase一3蛋白表达呈显著正相关(P<0.01)，即随着PrEN蛋白表达减低或缺失(86.3%，82/95)，Caspase一3蛋白的表达也减低甚至表达缺失(91 .5%，75/82)，此组患者容易复发转移(91 .7%，11/12)。 由K却lan一Meier生存曲线可见，Pl冤N蛋白阳性表达组的5年总生存率(86.1%)高于表达缺失组(70.5%)，经肠9 Rank法检验，二者生存率曲线分布差别有统计学意义(xZ二4.94，P<0.05)。单因素生存分析显示，影响总生存率的因素还有临床，rNM分期(xZ二6.22，P<0.05)、腋窝淋巴结转移(x，=6.04，p<0.05)、复发转移(x，=7.91，p<0.01)。经eox比例风险模型进行生存的多因素分析显示，腋窝淋巴结转移、复发转移两项指标作为对生存率的重要影响因素被纳人多元回归方程(B=1 .273，SE=0.474，Wald=7 .222，df=l，P=0.加7 vsB=1 .534，SE=0.485，Wald二10.017，df=l，P=0.002)，Pl下N(Score=0.476，df=l，p=0.490)未能进人方程，可能与其与腋