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目的：(1)研究子宫内膜异位症中是否存在上皮-间质转化现象；(2)研究雌激素在内异症EMT发生中的作用以及Wnt/β-catenin通路在雌激素促进内异症EMT发生中的作用；(3)探讨雌激素介导Wnt/β-catenin信号通路调控子宫内膜异位症EMT的分子机制。方法：(1)收集明确诊断内异症患者的在位和异位子宫内膜以及单纯因输卵管因素的不孕症患者子宫内膜(对照组),利用免疫组织化学方法检测EMT分子标志物E-cadherin、 N-cadherin和Vimentin以及核转录因子β-catenin、Snail在内异症在位(EU)和异位子宫内膜(EC)以及正常子宫内膜(NOR)中定位表达情况；(2) QRT-PCR和Western blotting检测内异症患者EU和EC以及NOR中EMT分子标志物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin以及核转录因子P-catenin和Snail的表达;(3)分离、培养原代人子宫内膜腺上皮细胞(Endometrial epithelial cells, EECs);以不同浓度(10-6、10-8mol/L)17β-雌二醇作用EECs 48h, qRT-PCR和Western blotting检测上皮细胞EMT标记物E-cadherin,间质表型标记物N-cadherin和E-cadherin转录抑制因子Snail的表达以及去磷酸化P-catenin的表达；光镜下观察细胞的形态变化；检测EECs体外粘附、侵袭与迁移能力；(4)分离、培养原代人子宫内膜腺上皮细胞(Endometrial epithelial cells, EECs), 10-6mol/L 17p-雌二醇作用EECs 48h,免疫荧光检测P-catenin的入核情况；Western blotting检测上皮细胞去磷酸化P-catenin的表达；(5)高分化子宫内膜腺癌细胞,即Ishikawa细胞代替EECs。以不同浓度(10-6、10-8mol/L) 17β-雌二醇作用Ishikawa细胞48h, qRT-PCR和Western blotting检测Ishikawa细胞EMT标记物E-cadherin、N-cadherin和E-cadherin转录抑制因子Snail以及去磷酸化P-catenin的表达;(6)利用siRNA靶向沉默Ishikawa细胞的P-catenin基因以阻断Wnt/β-catenin信号通路,以10-6mol/L 17β-雌二醇作用48h, Western blotting检测EMT标记分子物E-cadherin,间质表型标记物N-cadherin以及E-cadherin转录抑制因子Snail的表达；检测Ishikawa细胞体外粘附、侵袭与迁移能力；(7)分别构建Snail启动子荧光素酶报告基因载体,在Ishikawa细胞中应用共转染与双荧光素酶方法(Dual-luciferase Assay)分析β-catenin TCF/LEF对Snail基因靶启动子区域转录活性的影响；染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation)实验研究β-catenin/TCF/LEF对Snail基因启动子区域是否存在直接作用；(8)构建子宫内膜异位症NOD-SCID鼠模型,运用β-catenin siRNA阻断Wnt/p-catenin信号通路,观察雌激素对小鼠模型异位内膜EMT分子标志物E-cadherin、N-cadherin,核转录因子Snail的表达以及基质金属蛋白酶9 (Matrix metalloproteinases 9, MMP9)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。结果：(1)内异症患者EC中E-cadherin的表达较EU和NOR明显降低,而EU和NOR中E-cadherin的表达无显著差异；EC中N-cadherin、Vimentin的表达较EU和NOR明显增高,而EU和NOR中N-cadherin、Vimentin的表达无显著差异；EC中P-catenin和Snail的表达较在EU和NOR明显增高,而EU和NOR中P-catenin和Snail的表达无显著差异,β-catenin和Snail的表达存在正相关性；(2) QRT-PCR和Western blotting结果显示内异症患者EC中E-cadherin mRNA和蛋白的表达较EU和NOR明显降低,而N-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白的表达较EU和NOR明显增高;EC中β-catenin和Snail mRNA和蛋白的表达较EU和NOR明显增高；(3)以不同浓度17p-雌二醇(17β-E2)作用人子宫内膜腺上皮细胞(EECs) 48h;普通光学显微镜下观察,17β-E2作用后,细胞接近纺锤状,纤维样的形态,细胞间连接由紧密变得分散；免疫细胞化学结果显示17β-E2作用后,EECs中E-cadherin表达下降；qRT-PCR和Western blotting结果显示雌激素体外能明显促进EECs中N-cadherin、 β-catenin和核转录因子Snail的表达,抑制E-cadherin的表达；Transwell表明17β-E2增强EECs的侵袭与迁移能力；(4)雌激素能明显增加EECs中去磷酸化β-catenin的表达；免疫荧光结果表明雌激素能增加β-catenin的入核;(5)高分化子宫内膜腺癌细胞,即Ishikawa细胞代替EECs。以不同浓度(10石、10-8mol/L) 17β-雌二醇作用Ishikawa细胞48h, qRT-PCR和Western blotting结果显示雌激素体外能明显促进Ishikawa细胞N-cadherin、β-catenin和核转录因子Snail的表达,抑制E-cadherin的表达；(6) siRNA靶向沉默Ishikawa细胞β-catenin基因以阻断Wnt/β-catenin信号通路,10-6mol/L 17β-雌二醇作用48h, Western blotting结果显示雌激素不能够诱导EMT的发生,即E-cadherin表达没有下降,N-cadherin和Snail的表达没有上升；Transwell表明Ishikawa细胞的侵袭与迁移能力明显降低；(7)双荧光素酶和染色质免疫共沉淀检测结果显示β-catenin能与TCF3结合,作用于Snail启动子上游,正向调控Snail基因的表达,而雌激素能增强这一作用；(8)术后10天,Scrambled siRNA+E2、β-catenin siRNA+E2和空白组的模型鼠异位病灶发生率分别为：75%、25%和0；术后21天,Scrambled siRNA+E2、β-catenin siRNA+E2和空白组的模型鼠异位病灶发生率分别为：64%、0和0；雌激素能够增加异位病灶的种植率,而抑制β-catenin的表达后,种植的概率明显降低；Western blotting结果显示：术后10天,阴性siRNA组E-cadherin的表达低于siRNA干扰组和种植前组；N-cadherin、β-catenin和核转录因子Snail的表达高于siRNA干扰组和种植前组；术后21天,阴性siRNA组E-cadherin的表达低于种植前组；N-cadherin、β-catenin和核转录因子Snail的表达明显高于种植前组；IHC结果显示：术后10天,VEGF和MMP9表达高于siRNA干扰组和种植前组,而后两者之间无显著差异；术后21天,VEGF和MMP9表达明显高于种植前组。结论：(1)上皮-间质转化(EMT)参与了异位子宫内膜的侵袭和转移,促进了内异症的形成和发展；(2)雌激素在内异症EMT发生中起着关键作用,其机制是通过Wnt/β-catenin信号通路的激活来抑制E-cadherin表达,促进EMT生成。