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背景与目的胃癌(Gastric Cancer,GC)是我国高发的恶性肿瘤之一,缺乏有效的诊断和疗效预测分子标志物。研究表明胃癌组织微环境内中性粒细胞浸润,外周血中性粒细胞淋巴细胞比值(Neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)与预后相关。一方面中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil Extracellular Traps,NETs)是中性粒粒细胞发挥作用的重要方式,近几年NETs在恶性肿瘤中的作用受到广泛关注。另一方面,肿瘤微环境是导致多药耐药的主要原因。因此本课题旨在探索胃癌患者肿瘤微环境和外周血中NETs作为胃癌诊断和化疗疗效预测分子标志物的价值。方法首先采用免疫荧光染色法检测30例胃癌及癌旁组织标本内NETs相关蛋白,中性粒细胞弹力蛋白酶(Neutrophil elastase,NE)与瓜氨酸化组蛋白H3(Citrullinated histone H3,H3Cit)的共表达,以验证胃癌组织微环境中NETs的存在;然后通过酶联免疫吸附测定法分别测定122例胃癌晚期患者、83例胃癌术前患者、85例胃癌术后患者、70例胃良性疾病患者和85例健康人外周血中NE-DNA复合物吸光度(Optical density,OD)值,分析这5种人群外周血NETs表达的差异。并对62例接受一线治疗的晚期胃癌患者进行了近期疗效评价。结果1.通过对30例胃癌患者的肿瘤组织标本进行免疫荧光染色,共聚焦显微镜观察到胃癌组织中NE与H3Cit的共定位,明确NETs的存在;通过NE免疫组化染色发现肿瘤组织中有中性粒细胞聚集,在来自同一患者的瘤旁组织样本中,这种聚集减少(P<0.001);与肿瘤组织标本相比,癌旁组织标本的每视野中位NETs形成数明显较少(P<0.001)。2.外周血中血浆和血清中的NETs水平在以下群体中逐渐下降:晚期胃癌患者、胃癌术前患者、胃癌术后患者、胃良性疾病患者和健康人。3.通过Pearson相关系数或Spearman非参数分析确定了同一患者的胃癌组织和外周血样本中的NETs水平存在差异,有统计学意义(血浆:Spearman r=0.456,P=0.011;血清:Spearman r=0.580,P=0.001)。4.作为血清标志物,NETs对胃癌的诊断能力(AUC=0.909)优于癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)(AUC=0.805)和糖类抗原19-9(Carbohydrate antigen19-9,CA19-9)(AUC=0.634)。5.NETs与临床病理特征的相关性分析显示:1)血清中较高水平的NETs与淋巴结转移相关;2)外周血中CEA、CA19-9、中性粒细胞计数和NLR与NETs水平存在关联;3)外周血NETs水平与患者是否接受过手术有关。6.外周血NETs水平高低与患者PFS差异之间无统计学意义(血浆:分别为5.0月和5.5月,P=0.686;血清:分别为4.6月和6.0月,P=0.160)。此外,比例风险回归模型(Proportional hazards model,Cox)显示,在接受一线治疗的晚期胃癌患者中,外周血中的NETs水平不是PFS的独立预后因素。结论1.胃癌患者肿瘤组织和PB中均存在NETs,NETs水平在胃癌组织与PB之间、PB血清与血浆之间均具有相关性。2.PB NETs水平在胃癌、胃良性病变和健康人呈逐渐下降趋势。3.PB NETs水平显示在胃癌诊断能力方面高于CEA和CA19-9。4.PB NETs水平与胃癌患者淋巴结转移、肿瘤负荷、WBC计数、NLR、化疗有效性具有相关性,与PFS未显示相关性。