论文部分内容阅读
β-呋喃果糖苷酶(β-fructofuranosidase,β-FFase,EC 3.2.1.26)是一种可以水解带有β-呋喃果糖糖苷的有机物的酶。家蚕(Bombyx mori)的β-FFase基因BmSuc1是第一个获得克隆鉴定的动物型β-FFase编码基因,主要功能是规避桑叶乳汁中糖类似物生物碱的毒害,在家蚕糖代谢中发挥重要作用。几丁质是昆虫机体的重要组成成分,是家蚕生长发育过程中必不可少的一种物质,而甘油三酯是所有动物储存脂肪的主要形式,在贮存营养、免疫、解毒及供能等方面都有重要作用。家蚕糖代谢和几丁质与甘油三酯代谢都有着重要的联系,因此为了探究BmSuc1和几丁质与甘油三酯代谢之间的关系,本研究进行了以下相关研究:(1)首先为了探究糖代谢对几丁质和甘油三酯的影响,给家蚕添食过量的葡萄糖和果糖,表皮几丁质绝对含量均显著性上升,血淋巴和脂肪体中甘油三脂含量上升,表型上脂肪体的脂滴明显变大,说明糖代谢对几丁质和甘油三酯代谢具有重要作用。(2)为了敲低BmSuc1的表达水平,构建了三个BmSuc1-dsRNA表达载体,q RT-PCR的结果表明,dsRNA2片段对幼虫体内BmSuc1的表达干涉效果最好。从三龄起蚕开始用表达BmSuc1-dsRNA的菌液添食幼虫,收集实验材料,开展后续研究。(3)干涉BmSuc1后,检测了家蚕几丁质通路基因表达水平,发现几丁质代谢通路上BmGPI、BmPAGM、BmUAP和BmCDA6等基因表达水平上调,BmChs B、BmCDA7和BmCDA8表达水平下调,中肠和表皮中的几丁质含量均显著性下降;丝腺的角质层变薄。表明β-FFase的表达量下调影响了几丁质的合成和降解。(4)干涉BmSuc1后,五龄起蚕脂肪体中的甘油三酯代谢通路的基因BmAcly、BmAcaca、BmFasn、BmGPAT1、BmAGPAT和BmDGAT表达水平下降,脂肪酶基因BmTGL表达量上升;脂肪体和血淋巴中甘油三酯的含量也显著性下调;脂肪体的脂滴空洞变小,说明积累的甘油酯变少。表明β-FFase的表达量下调改变了脂肪的合成和降解。综上,论文研究通过分析RNA干涉BmSuc1后几丁质和甘油三酯代谢途径,在前期研究基础之上进一步明确了BmSuc1在蚕体中通过调节糖代谢影响几丁质和甘油三酯的代谢,为深入了解β-FFase的功能提供了重要参考信息。