恶性肿瘤严重危害人类的健康和生命。目前，恶性肿瘤己超过心脑血管疾病成为人类致死的第一位病因。肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）素有“癌王”之称，是全球最常见的恶性肿瘤之一。目前，肿瘤的传统治疗手段已经出现了严重的瓶颈效应，而以溶瘤腺病毒（肿瘤特异性增殖腺病毒）为代表的生物治疗成为肿瘤治疗研究的热点。此后发展的靶向基因-病毒治疗(Targeting-Gene-Virotherapy)策略及具有代表性的基因病毒制剂ZD55-IL-24的出现给肿瘤治疗带来了新的希望。　　 ZD55-IL-24是利用溶瘤腺病毒ZD55(删除了E1B55kDa，特异性靶向肿瘤细胞)携带治疗基因mda-7/IL-24(melanoma differentiation associated gene-7/interleukin-24，一种新型的多功能细胞因子，具有广泛的抗肿瘤的作用，能选择性的促进肿瘤细胞调亡、具有潜在的“旁观者效应”、提高放射疗效、诱导免疫调节反应和抑制肿瘤血管生成的作用），既保留了病毒杀伤肿瘤细胞的能力，同时随着病毒在肿瘤细胞中的复制，也大大增加了治疗基因在癌细胞中的表达量，同时发挥病毒治疗和基因治疗的双重功能。对结肠癌进行的体内和体外实验结果揭示ZD55-IL-24具有明显的抗肿瘤活性，这为肿瘤治疗提供了新的思路。然而ZD55-IL-24并不能消除所有的肿瘤。　　 设计及目的：最近，刘新垣院士提出肿瘤的靶向基因-病毒个性化治疗(Individual Targeting Gene-Virotherapy)策略和化学药物-基因-病毒治疗(Chemo-Gene-Virotherapy)策略并取得了很好的效果。为此，我们综合以上设计如下实验：一方面，在ZD55-IL-24基础上对病毒进行改造，构建双靶向溶瘤腺病毒Ad-eAFP-E1A-ZD55-E1B-MCMVp-IL-24(简称AD55-IL-24)，期望对肝癌进行个性化治疗。此病毒具有两个优点，(1)利用甲胎蛋白(a-Fetoprotein，AFP)能在肝癌细胞中高效且特异表达的特点，将AFP启动子用于控制病毒复制增殖所必需的基因E1A，使腺病毒只能在AFP活性阳性的肿瘤细胞中增殖，而不能在AFP活性阴性的正常细胞中复制，同时将SV40(simian vacuolating virus40 or Simian virus40)增强子与AFP启动子串联从而有效地增强后者的启动活性。(2)用目前启动子中活性最强的MCMV(murine leukenua cytomegalovirus)启动子强效启动mda-7/IL-24的表达；另一方面，将ZD55-IL-24与有“药物中的青霉素”之称的化疗药物顺铂联合，期望能增强对肿瘤细胞的杀伤。　　 方法：　　 (1)在HEK293细胞中通过同源重组的方法包装病毒；　　 (2)通过荧光显微镜观察，荧光定量PCR、流式细胞术和western blot分析病毒的复制能力；　　 (3)通过细胞的存活率和细胞病变效应实验，进行杀伤性分析和安全性评价：　　 (4)再通过形态学分析，凋亡细胞染色实验，流式细胞术和western blot检测细胞凋亡。　　 结果：　　 (1)成功构建了肝癌特异性杀伤溶瘤腺病毒AD55-IL-24和AD55-EGFP，体外实验检测AD55系统优于ZD55系统，具有更强的肝癌特异性增殖能力，安全性极高；AD55-IL-24不仅显示了潜在的肝癌特异性杀伤能力，而且实现了ZD55系统靶向性、AFP靶向性、mda-IL-24靶向性的三重协同保险，从而最大程度的保证其生物安全性；　　 (2)ZD55-IL-24联合顺铂能增强对肿瘤细胞的杀伤和对肿瘤细胞凋亡的诱导，降低药物用量以减少对正常细胞的毒性。　　 结论及意义：本研究初步实践了肿瘤的靶向基因-病毒个性化治疗策略，成功构建了肝癌特异性杀伤溶瘤腺病毒载体，为I期临床寻求更为有效的肿瘤靶向基因治疗方案创造了条件，为肝癌个性化治疗奠定了坚实的基础；同时创新性地实践了化学药物-基因-病毒治疗策略，首次将溶瘤病毒ZD55、治疗基因mda-7/IL-24和化疗药物顺铂联合起来，并取得了很好的疗效，这为肿瘤治疗提供了很好的思路。