IL-6/STAT3信号通路与肝硬变大鼠肝部分切除后肝再生的实验研究

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目的建立肝硬化大鼠肝部份切除模型,了解肝硬化大鼠与正常大鼠肝切除后肝再生过程的差异,探讨IL-6/STAT3信号通路在肝硬变大鼠肝部分切除后肝再生障碍中的作用。方法皮下注射50%四氯化碳橄榄油溶液+10%乙醇喂养的复合方法建立SPF级SD大鼠肝硬化模型,剂量为0.3ml/100g,时间为9周。正常大鼠为对照组。对照组及肝硬化组大鼠均切除肝脏中叶及左叶(约70%),分别于术后0h、1h、2h、4h、12h、24h、48h及72h八个不同的时相点处死动物模型,收集并保存残肝组织及血液标本,离心血液收集血清后-80℃保存,肝组织一部分-80℃保存备用,另一部分福尔马林固定后48小时内行石蜡包埋。全自动生化分析仪测定大鼠血清ALT、AST、ALB以了解大鼠肝功能变化,Elisa法检测血清IL-6及血清TNF-α浓度,免疫组化二步法检测残肝组织切片PCNA阳性细胞数及活性STAT3蛋白阳性细胞数,常规病理切片光镜观察肝组织病理改变、有丝分裂细胞数。采用SPSS17.0和excel2003进行统计分析及做图,数据采用均数士标准差(x土s)方式记录,组间差别比较采用t检验,P<0.05为有统计学意义。结果1、在模型制作过程中,对照组及实验组共有5只死亡,其中实验组死亡2只,造模成功率分别为94.1%及93.0%,光学显微镜下HE染色可见肝硬化大鼠正常肝小叶结构被破坏,纤维组织广泛增生,形成假小叶,假小叶内肝细胞索排列紊乱,可见小叶中央静脉缺如、偏位、或有2个以上;对照组大鼠肝组织正常,肝小叶形态结构规则;2、各时间段实验组大鼠血清ALT、AST含量基本均高于对照组,而实验组大鼠血清ALB均低于对照组,但伴随肝再生过程的进展,肝功能均能逐渐恢复;3、肝大部切除术后1-2d是肝脏增值最活跃阶段,PCNA标记细胞数及有丝分裂细胞数均于切除后12小时开始迅速升高,并于切除后48小时达峰值,然后逐渐下降,肝硬化组有丝分裂细胞数也于术后12小时开始升高,但术后24小时已达高峰并下降,肝硬化组PCNA标记细胞数在12小时前均高于对照组,于切除后48小时达高峰后下降,其峰值远低于对照组;4、肝切除后,对照组血清IL-6水平在术后1h达高峰,后缓慢下降;而实验组则到术后12小时才缓慢到达高峰,之前均低于对照组,72h出现第二次高峰;肝切除后活性STAT3蛋白于2h达高峰后迅速下降至极低水平,但实验组2h STAT3阳性细胞数明显低于对照组。结论1、肝部份切除后肝硬化组肝细胞再生能力远低于对照组,肝硬化大鼠肝再生受抑制;2、肝硬化大鼠部分肝切除术后肝再生障碍与其早期IL-6水平低下而导致STAT3蛋白活化不足有关。
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