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背景与目的:目前慢性肝病的患者众多,若未加干预,很多慢性肝病会发展为终末期肝病,一旦发展为终末期肝病,常规的治疗效果不理想,唯一疗效确切的是原位肝移植(Orthotopic livertransplantation,OLT),术后生存率一年为85%~90%,三年生存率75%~80%,但原位肝移植存在肝源不足,而且费用昂贵,以及移植后的免疫排斥反应等因素制约了它的发展,寻找一种新的方法治疗终末期肝病显得特别的重要。关于骨髓间充质干细胞(Bone marrowmesenchymal stem cells,BM-MSCs)方面的研究成为了近年来干细胞研究的热点,在一定的条件下BM-MSCs可以向骨细胞、成骨细胞、脂肪细胞、肝细胞、神经元细胞等分化。BM-MSCs存在于骨髓中,取材方便,容易培养,生长旺盛,免疫原性低,不存在伦理问题,是理想的干细胞移植的种子细胞。另外,国内外大量的文献报道肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)被广泛用于肝相关干细胞体外诱导分化的实验研究,可调控BM-MSCs分化为肝细胞。粒细胞集落刺激因子(granlocyte-colony stimulating factor,G-CSF)是一个大小为20-Ku的糖蛋白,有文献报道G-CSF体外培养BM-MSCs通过ILISA检测到HGF水平,还有报道培养液中加入了G-CSF能提高BM-MSCs活性。本实验的目的是探讨HGF以及G-CSF可否诱导大鼠BM-MSCs分化为肝样细胞,为干细胞的研究提供更有效的诱导方案。方法:以贴壁法分离、培养大鼠BM-MSCs,流式细胞术鉴定表面标志。实验分为:对照组(10%FBS),0.1μmG-CSF干预组,20ng/mLHGF干预组,HGF联合G-CSF共同干预组(0.1μmG-CSF+20ng/mLHGF),诱导后第7天、14天和21天提取细胞总RNA以及总蛋白后进行RT-PCR和Western blot检测白蛋白(ALB)和甲胎蛋白(AFP)基因mRNA转录和蛋白水平。结果:20ng/mLHGF干预组和HGF联合G-CSF共同干预组P3代BM-MSCs诱导后细胞形态似肝样细胞。BM-MSCs表面标志物:CD34-PE0.3%,CD45-FITC0.1%,CD90-FITC99.6%,CD105-PE99.8%。20ng/mLHGF干预组和HGF联合G-CSF共同干预组检测到白蛋白(ALB)和甲胎蛋白(AFP)基因mRNA转录水平及蛋白水平表达。在第7天、14天、21天,随时间增加ALB表达量递增、而AFP表达量递减,且同一时间两组表达量均有差异(P<0.05)。结论:(1)HGF能诱导大鼠BM-MSCs分化为肝样细胞。(2)G-CSF对HGF诱导大鼠BM-MSCs分化为肝样细胞有协同作用。