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由于人们对海产品需求量的增大,大量的下脚料被抛弃或低值处理,造成了资源及环境问题。另外,生产生活中对酶的需求也不再满足于从陆生动植物身上提取,而逐渐放眼于利用海洋特别是深海资源中提取制备酶制剂。而在章鱼下脚料利用方面,提取纯化酸性蛋白酶方面的探讨很少。章鱼中的蛋白酶含量高、活性强,是提取酸性蛋白酶的优良原料。所以本文主要研究从章鱼内脏提取制备酸性蛋白酶,以提高章鱼副产物的利用率,达到变废为宝的目的,并为后续的研究提供可参考依据。1.对章鱼内脏的主要成分分析,粗蛋白质的含量为16.0%、水分为75.8%、灰分为2.6%、脂肪为2.6%,说明章鱼内脏可作为提取酶等含氮类物质的材料。2.以章鱼内脏为原料提取酸性蛋白酶,通过单因素实验及响应面法优化,获得最佳提取方案为:pH值5.0、温度30℃、时间2.5 h、料液比1:5(内脏与缓冲液配比),由此得到的粗酶液酶活为917.2 nkat/g内脏,对应比活为17.4 nkat/mg;粗酶液中大部分为酸性蛋白酶,占总量的76.0%。3.粗酶液的初步分离结果为:(1)盐析:硫酸铵饱和度为80%,纯化倍数最大值为1.1,酶活回收率为76.0%,蛋白质回收率为69.0%。(2)有机溶剂辅助盐析:盐析过程中加入2%无水乙醇时,其纯化倍数最大2.2,酶活回收率为93.2%,蛋白回收率为51.0%。(3)膜分离纯化倍数为6.4,酶活回收率为28.8%,蛋白回收率为4.5%。4.通过正交实验对离子交换条件进行优化,得到的最优方案为:pH值为7.0的缓冲液,上样量为经膜分离处理后滤液10 mL,流速3 mL/min,洗脱液中NaCl浓度为0.5 mol/L,由此得到的产品纯化倍数为16.5,相对于抽提粗液的酶活回收率为23.0%,蛋白回收率为1.5%。5.章鱼源酸性蛋白酶初步应用实验结果如下:(1)酶解马鲛鱼皮制备抗氧化物质:经酸性蛋白酶酶解后的酶解液具有还原力、对羟.基的清除率为58.1%、超氧阴离子自由基的清除率为40.6%;(2)酸性蛋白酶酶解制备马鲛鱼皮胶原蛋白提取率是29.5%。本课题从章鱼内脏中得到的酸性蛋白酶,在制备方面十分简单,也对我国高新技术和水产养殖业有着的重要意义。