论文部分内容阅读
背景绒毛膜癌（choriocarcinoma，CC）（简称绒癌）是来源于胎盘绒毛滋养细胞的恶性肿瘤，主要经血液播散，转移发生早且广泛。目前，致绒癌患者死亡的主要原因之一，就是未能及时并有效的控制绒癌细胞转移的发生和发展。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是最重要的肿瘤血管生成调控因子之一，通过与其受体激酶功能区受体（kinase insert domain containing receptor，KDR）结合，发挥促进肿瘤血管生成的作用，为肿瘤细胞的生长、增殖、转移，提供重要的物质基础。KDR主要分布在肿瘤区新生血管内皮表面，VEGF通过旁分泌机制起作用。此外在某些肿瘤细胞中亦发现有KDR的表达，预示VEGF还存在自分泌调节途径。绒毛膜癌是一个高度血管化的恶性肿瘤，已证实VEGF在其中表达，但KDR表达情况如何，尚未见系统研究。而特化蛋白1（special protein 1，Sp1）是一种普遍存在于哺乳动物细胞中的转录调节因子，KDR在转录水平上可能受其调节。目的检测人绒毛膜癌JEG-3细胞中Sp1和KDR mRNA表达，并以Sp1反义寡核苷酸干扰JEG-3细胞，证明KDR在转录水平上受Sp1的调控，通过探讨影响KDR表达的因素，为临床抗绒癌转移治疗提供新的思路。方法逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测JEG-3细胞中Sp1和KDR mRNA的表达情况。通过脂质体转染试剂lipofectamineTM 2000，将Sp1反义寡核苷酸转染到JEG-3细胞中，Sp1反义寡核苷酸终浓度分别为0.1μmol／L、0.2μmol／L、0.3μmol／L、0.4μmol／L、0.5μmol／L，同时设立空白对照组和终浓度为0.5μmol／L的正义序列对照组。RT-PCR检测不同组别JEG-3细胞中Sp1、KDR mRNA的表达，图象分析系统分析扩增条带光密度值，以GAPDH为内参，计算mRNA相对表达水平。结果（1）在JEG-3细胞中检测到Sp1和KDR mRNA的表达。（2）Sp1反义寡核苷酸对JEG-3细胞Sp1和KDR mRNA的表达均有明显抑制作用，与正义序列组和空白对照组比较有显著差异（P＜0.05）。（3）用0.1μmol／L、0.2μmol／L、0.3μmol／L、0.4μmol／L、0.5μmol／L5个浓度的Sp1反义寡核苷酸处理24小时后，Sp1 mRNA、KDRmRNA的表达均受到抑制，其中以0.5μmol／L的Sp1反义寡核苷酸浓度抑制作用最明显，且Sp1反义寡核苷酸对JEG-3细胞Sp1、KDR表达的抑制作用呈浓度依赖性（P＜0.05）。（4）正义序列和空白对照的JEG-3细胞中Sp1、KDR的表达没有显著差异（P＞0.05）。结论（1）人绒毛膜癌JEG-3细胞中有血管内皮生长因子受体KDR的表达，说明VEGF不仅通过调节血管新生促进肿瘤生长，还可能直接作用于肿瘤细胞，对绒毛膜癌转移的发生发展起着重要作用。（2）Sp1反义寡核苷酸以剂量依赖性方式有效抑制JEG-3细胞中的Sp1 mRNA表达。（3）人绒毛膜癌JEG-3细胞中有转录因子Sp1的表达，且Sp1可能从转录水平上调控血管内皮生长因子受体KDR的表达。