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背景低氧是呼吸系统疾病,如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)等常伴发的病理生理过程,低氧可以影响气道的慢性炎症进程及气道重塑。糖皮质激素(GC)是呼吸系统疾病的常用药物,糖皮质激素通过与胞浆中的糖皮质激素受体(GR)结合,继之入核与糖皮质激素受体反应元件(GRE)结合调节一系列下游抗炎基因的表达。或者通过与AP-1,NF-κB相互作用抑制多种炎性细胞因子受体,酶,粘附分子的表达。激素受体主要包括两种亚型,GRα和GRβ,GRα是激素发挥功能的受体亚型,目前大多数研究显示GRβ是GRα的负性调控因子。临床上糖皮质激素在哮喘,COPD的治疗过程中会出现效果不明显甚至激素抵抗的现象,当无限增加GC剂量时仍不能取得预期的疗效,反而增加了GC的副作用。关于激素抵抗产生的原因目前尚不明确。伴发有低氧的慢性炎症性疾病如COPD,支气管哮喘以及慢性炎症性肠炎常常有激素作用低下的现象,而低氧是否是引起激素作用减弱的原因国内尚未见报道,本实验的研究目的即通过观察低氧下A549细胞GRα和GRβ的表达水平来进一步探讨低氧对激素作用的影响。目的研究不同低氧时间培养下,人肺腺癌上皮A549细胞糖皮质激素受体α(GRα)和糖皮质激素受体β(GRβ)的表达。探讨低氧是否与糖皮质激素抵抗的发生有关。方法1.低氧小室和普通培养箱中分别对应培养相同密度的肺腺癌上皮A549细胞24h,48h和72h。2.分别于24h,48h和72h收取细胞,在倒置显微镜下运用SPOT软件拍摄照片以观察24h,48h和72h低氧培养组与对照组比较细胞形态学以及细胞数目的改变。3.用RT-PCR的方法来研究24h,48h和72h低氧培养组细胞与对照组比较GRα和GRβmRNA表达的改变。4.用免疫细胞化学的方法来研究24h,48h和72h低氧培养组细胞与对照组比较GRα和GRβ蛋白表达的改变。结果1.A549细胞低氧培养24h、48h、72h后细胞数目和形态学的改变。随着低氧时间的延长,细胞生长速度48h和72h与24h比较生长速度逐渐减慢,视野内细胞越来越少,48h低氧组细胞约减少至48h对照组细胞的50%,72h低氧组细胞约减少至72h对照组细胞的25%,且随着低氧培养时间的延长,细胞肿胀变形逐渐加剧。2.A549细胞低氧培养24h、48h、72h后GRα和GRβmRNA表达水平的改变24hGRαmRNA表达水平低氧组[0.914±0.079]与对照组[0.883±0.208]比较略有降低,但差异无统计学意义(P＞0.05);48h、72hGRαmRNA表达水平低氧组[0.794±0.029、0.828±0.171]与对照组(1.054±0.120、1.187±0.173]比较显著降低(P＜0.05);24h、48h、72hGRβmRNA表达水平低氧组[0.439±0.175、0.437±0.117、0.433±0.101]与对照组(0.429±0.140、0.443±0.114、0.553±0.110]比较差异无统计学意义(P＞0.05)。3.A549细胞低氧培养24h、48h、72h后GRα和GRβ蛋白表达水平的改变。24hGRα蛋白表达水平低氧组与对照组比较无显著改变;48h和72hGRα蛋白表达水平低氧组与对照组比较显著降低;24h、48h、72hGRβ的蛋白表达水平低氧组与对照组比较无显著改变。结论A549细胞低氧培养48h、72hGRα的mRNA和蛋白表达水平与对照组比较显著降低。低氧环境可能会影响糖皮质激素作用的发挥。