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目的:研究华蟾素对宫颈癌Hela和SiHa细胞增殖、侵袭、细胞周期、凋亡作用。 方法:1.将不同浓度的华蟾素作用于宫颈癌细胞SiHa和Hela,并将每种细胞分为对照组(含培养液及细胞)、实验组(含培养液、细胞及不同浓度的华蟾素),采用MTT比色法测定不同时间(24小时、48小时、72小时)和不同浓度(1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ml)华蟾素对SiHa和Hela细胞的生长抑制作用;2.将不同浓度的华蟾素(1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ml)作用于宫颈癌细胞SiHa和Hela48小时,采用流式细胞仪检测华蟾素对宫颈癌Siha及Hela细胞周期的影响;3.细胞划痕实验检测华蟾素对宫颈癌Siha及Hela细胞侵袭能力影响;4.进行Hoechst33258染色,空白对照组细胞及华蟾素(1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ml)试验组,于免疫荧光显微镜下观察细胞凋亡形态;5.Western blot检测华蟾素对宫颈癌Siha及Hela细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。 结果:1.MTT比色法检测不同浓度的华蟾素作用于宫颈癌细胞珠Siha及Hela测定结果显示:当不同浓度的华蟾素作用于宫颈癌细胞珠Siha和Hela24小时、48小时以及72小时后,可见细胞生长速度逐渐减弱,并且随着华蟾素药物浓度从1ug/ml逐渐升高至1000ug/ml,以及作用时间从24小时延长到72小时,这种抑制作用逐渐增强,表明具有时间剂量效应关系。华蟾素各浓度组与对照组比较,统计具有显著性差异(P<0.01)。2.与对照组相比较,不同浓度(1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml、1000ug/ml)的华蟾素作用于宫颈癌Siha及Hela细胞48小时后,细胞周期中G2/M期细胞比例无显著变化,G0/G1期细胞在细胞周期中所占的比例随着浓度的增加在不断增加,S期细胞逐渐减少。实验组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。3.不同浓度(1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml、l000ug/ml)的华蟾素作用于宫颈癌Siha及siha细胞24小时和48h小时后,划痕宽度大于含培养液及细胞的对照组。计算各组细胞的迁移率结果显示:Siha细胞在华蟾素作用24小时和48小时时,不同浓度的华蟾素组与对照组相比差异不具有统计学意义(P>0.05);而宫颈癌Hela细胞在不同浓度的华蟾素作用24小时和48小时,迁移率具有统计学意义(P<0.05),小于对照组:提示华蟾素对Siha细胞的迁移无明显的抑制作用,对HeLa细胞有一定的抑制作用。华蟾素不能抑制Siha细胞迁移,即不能降低细胞向远处转移的能力;能抑制HeLa细胞迁移,即能够降低细胞向远处转移的能力,并且随着华蟾素浓度升高,抑制作用越明显。4.Hoechst33258染色结果显示对照组细胞核呈弥漫均匀亮蓝色荧光。经10ug/m和100ug/ml浓度华蟾素处理后,宫颈癌Siha及Hela细胞均可见浓染致密的颗粒块状蓝色荧光,随药物浓度的增大,细胞的细胞形态学变化更明显。5.经华蟾素作用24h后,不同浓度华蟾素组与对照组相比较,Bcl-2/Bax比率依次降低,各组差异具有统计学意义(P<0.05);Hela细胞的Bcl-2蛋白和bax蛋白均无明显递增或递减趋势,Bcl-2/Bax比率无明显降低,不具有统计学意义。 结论:1.华蟾素能够抑制宫颈癌Siha和Hela细胞增值,抑制作用呈现一定的时间剂量效应关系。2.华蟾素可阻滞细胞增殖于S期,促进宫颈癌Siha和Hela细胞凋亡,诱导作用呈现出时间剂量效应关系。3.华蟾素可以在一定程度上抑制宫颈癌HeLa细胞向远处迁移,一定程度上降低宫颈癌Hela细胞向远处转移的能力。而华蟾素对宫颈癌Siha细胞无明显抑制作用。4.华蟾素诱导宫颈癌SiHa细胞调亡的可能机制是抑制Bcl-2蛋白表达、促进Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比率。而华蟾素诱导宫颈癌Hela细胞调亡,可能还存在其他机制。