人诱导多能干细胞系的建立

来源 :内蒙古大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:liuqingsong835200
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本实验通过电转染法将Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4、Nanog、Lin28、Rarg和Lrh18个外源转录因子导入人胚胎成纤维细胞(human embryonic fibroblast,hEF)使其重编程为人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells,hiPS细胞)。一部分hiPS细胞接种到小鼠饲养层细胞上;另一部分接种到无饲养层细胞的培养体系中。在4种hiPS细胞培养液中一共成功建立了8个hiPS细胞系,有饲养层细胞和无饲养层细胞各4个细胞系。细胞分别命名为hiPS-ABCL、hiPS-2iLGOY、hiPS-E8、和hiPS-C2L。以人胚胎干细胞系hES-t2iLGOY和hESE8为对照,对新建立的无饲养层的4个hiPS细胞系的各项生物学特征进行了检测鉴定。4个hiPS细胞系在体外能长期稳定增殖,hiPS-E8细胞克隆形态呈扁平状,其余3个细胞系都呈椭圆状;hiPS-E8细胞碱性磷酸酶染色为弱阳性或阴性,其余3个细胞系碱性磷酸酶染色均为阳性。hiPS-ABCL、hiPS-2iLGOY、hiPS-E8、和hiPS-C2L细胞均表达多能基因Oct4、Sox2、Nanog,而其表达水平均低于对照组,而多能基因Zic2表达水平均高于对照组。hiPS-ABCL在免疫缺陷小鼠体内能形成畸胎瘤。但是连续传代的无饲养层hiPS-ABCL细胞核型不稳定且不具备分化为PGCLCs的能力。尽管hiPS细胞系建立技术已经发展相对成熟,但重编程过程仍然还有很多未知的因素且效率低下,本研究创建的新型hiPS制备及培养体系将会为未来hiPS研究提供一定的理论及技术基础。
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