第一部分白血病裸鼠模型建立及卡介苗抑白血病作用研究目的:长期以来人们一直在探索一种新型的白血病治疗方法,其中生物治疗成为目前较为提倡和大胆尝试的方法。辅助疗法是在适当治疗方式这一背景下,更可能有效地减小肿瘤负荷。现在肿瘤的辅助治疗中以卡介苗治疗膀胱癌较为成熟,而对于卡介苗用于急性白血病患者的治疗研究却很少有文献报道。本文通过建立人早幼粒白血病异种移植模型,并进一步探讨卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin vaccine,BCG)的抗白血病作用。方法:对8～10周龄的BALB/c裸鼠皮下接种1×10~7/ml人早幼粒细胞白血病细胞株(HL-60)建立白血病裸鼠模型。随机分为两组,对照组和实验组,对照组于白血病组织内接种生理盐水,实验组又分为BCG组(T1)、灭活的BCG组(T2)。观察各组裸鼠带瘤生存情况,采用HE染色了解皮下及其他脏器白血病浸润情况,免疫组化方法观察白血病浸润组织接种卡介苗后的免疫反应。结果:(1)HL-60细胞植入裸鼠皮下,5～7天发现裸鼠于体表接种部位形成淡紫红色的肿块,并逐渐出现局部及肝脏脾脏转移。(2)BCG组、灭活的BCG组均出现不同程度的肿瘤组织坏死现象。(3)对照组及实验组均可以在肿瘤组织内及边缘区见到CD20阳性的细胞,尤其在使用BCG裸鼠的肿瘤组织及坏死区可以见到大量CD20阳性细胞聚集的现象,且以单独应用活BCG的负瘤裸鼠为著。结论:1、HL-60细胞较易形成裸鼠人白血病模型,并有全身转移的现象。2、接种BCG后白血病组织有明显的炎性细胞浸润,伴随白血病细胞坏死。3、BCG能延缓白血病细胞的增长,延长白血病裸鼠的生存期,提示BCG有明显的抗白血病作用。第二部分卡介苗体外激活淋巴细胞对白血病裸鼠杀伤作用的机制研究目的:肿瘤微小残留病和多药耐药是血液肿瘤治疗达完全缓解后复发和导致难治性的主要原因,成为攻克血液肿瘤的难点。研究表明白血病在获得完全缓解后进行免疫治疗可提高疗效,可提高白血病患儿长期无病生存率。本文通过建立人早幼粒白血病(HL-60)突变株细胞异种移植模型,探讨卡介苗(BCG)抑制白血病裸鼠白血病细胞生长的作用及其机理,为卡介苗临床应用提供理论依据。方法:对8～10周龄的BALB/c裸鼠皮下接种1×10~7/ml HL-60细胞,建立白血病裸鼠模型。首先经rhGM-CSF+rhIL-4+rhTNF-α(GIT)诱导培养DC,应用DC激活淋巴细胞,再将体外培养的免疫活性细胞注入裸鼠肿瘤组织内,根据DC激活淋巴细胞的方式不同分为Group1:GIT诱导培养DC与淋巴细胞直接共同孵育;Group2:BCG组(DC+BCG+淋巴细胞);Group3:灭活BCG组(DC+灭活BCG+淋巴细胞);Group4:DC+BCG+淋巴细胞+HL-60抗原组,观察各组裸鼠带瘤生存情况,采用HE染色观察白血病细胞的浸润,采用免疫组化了解免疫细胞的反应及分布。结果:(1)HL-60细胞植入裸鼠皮下,5～7天发现各组裸鼠于体表接种部位形成淡紫红色的肿块,并逐渐出现局部及肝脏脾脏浸润(2)裸鼠肿瘤组织内接种体外激活的免疫细胞后,各组均出现不同程度的肿瘤组织坏死现象。(3)免疫活性淋巴细胞组裸鼠较其他药物治疗组的裸鼠生存时间延长约1～2天。(4)实验各组肿瘤组织内有大量的炎症细胞,坏死组织周围可见到大量小鼠自身的B淋巴细胞,Group4组肿瘤组织内可见更广泛的坏死区域。(5)裸鼠局部组织见CD35、CD45RO及CD8阳性细胞浸润。结论:1、HL-60细胞较易形成白血病移植裸鼠模型。2、BCG能直接诱导DC成熟,增强其抗原递呈功能。3、活BCG与灭活BCG有同样诱导DC成熟的作用。4、经树突状细胞体外提呈抗原的免疫活性淋巴细胞可显著杀伤肿瘤组织,延长负瘤小鼠的生存时间。5、白血病肿瘤部位有裸鼠自身的细胞CD20淋巴细胞浸润以及有CD35、CD45RO阳性细胞的表达,在Group4组还存在CD8阳性细胞。提示卡介苗抗肿瘤作用是通过促进DC细胞成熟、裸鼠自身B淋巴细胞浸润及免疫活性T淋巴细胞等多种因素共同作用的结果。