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多胺（polyamines,PAs）是一类含有两个及以上氨基、带正电的小分子脂肪族含氮碱,广泛存在于动物、植物、藻类和微生物体内,哺乳动物细胞中主要包括腐胺、亚精胺和精胺。研究表明,多胺在中东呼吸综合征病毒（middle east respiratory syndrome virus,MERS）、脊髓灰质炎病毒（poliovirus,PV）、寨卡病毒（zika,ZIKV）等多种病毒感染与复制中发挥着重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是一种严重危害养猪业的病毒,主要引起母猪的繁殖障碍以及新生仔猪的大量死亡,给养猪业造成了巨大损失。目前,对多胺在PRRSV感染与复制中的作用尚无报道。本课题以多胺为切入点,探讨了多胺合成代谢途径与PRRSV复制之间的相互关系,初步揭示了多胺调控PRRSV增殖的机制,为阐明PRRSV的感染机制奠定了基础。主要研究内容与结果如下:1.PRRSV感染胞内多胺水平降低为了探讨PRRSV感染后,细胞内多胺水平的变化情况。将PRRSV接种PK-15CD163细胞（一种表达PRRSV受体CD163的PK-15细胞）,通过薄层色谱分析检测PRRSV感染后不同时间胞内多胺的水平,发现PRRSV感染后,胞内多胺水平降低,且呈时间依赖性,表明PRRSV感染可引起胞内多胺水平发生改变。2.多胺促进PRRSV增殖DFMO是一种特异性抑制多胺代谢途径中鸟氨酸脱羧酶（ornithine decarboxylase,ODC）活性的抑制剂。用DFMO处理PK-15CD163细胞,通过薄层色谱分析检测证实DFMO处理能够显著降低细胞的多胺水平,且呈时间依赖性。用DFMO预处理细胞,然后接种PRRSV,通过荧光定量和空斑实验分别检测病毒基因组的拷贝数以及病毒滴度,发现抑制细胞的多胺代谢途径显著降低PRRSV的复制与病毒滴度,表明胞内多胺水平的降低抑制PRRSV的增殖。同时,先用DFMO下调细胞内多胺水平,再添加外源多胺,发现能够回复病毒滴度,且与添加的外源多胺浓度呈剂量依赖性,进一步证明多胺促进PRRSV增殖。3.亚精胺、精胺促进PRRSV增殖为了进一步探讨具体哪种或哪几种多胺分子参与调控PRRSV增殖,利用DFMO处理下调胞内多胺后,分别添加腐胺、亚精胺或精胺,然后接种PRRSV。通过实时荧光定量PCR检测发现,亚精胺、精胺能够回复DFMO处理引起PRRSV基因组拷贝数降低,而腐胺对PRRSV的复制无明显影响;Western Blot检测PRRSV N蛋白的表达水平也得到了类似的结果,进一步说明亚精胺、精胺促进PRRSV增殖,腐胺对PRRSV增殖无显著影响。4.SAT1抑制PRRSV增殖SAT1是多胺代谢中的第一限速酶,能够降低精胺和亚精胺水平。为进一步探讨多胺与PRRSV增殖间的关系,通过实时荧光定量PCR实验检测PRRSV感染对细胞SAT1表达的影响,结果发现PRRSV感染显著上调SAT1的mRNA表达,提示SAT1可能参与调控PRRSV的增殖。进一步采用SAT1的激活剂DENSpm上调SAT1的表达,并通过空斑实验和Western Blot检测其对PRRSV增殖以及蛋白表达的影响。结果显示DENSpm处理抑制PRRSV增殖和病毒蛋白表达,进一步说明精胺和亚精胺能够促进PRRSV增殖。