作为双相免疫调节剂，胸腺五肽（TP-5）临床上主要用于免疫功能低下的治疗以及多种重症疾病的辅助用药。由于其肽类结构特点，口服易被胃肠道酶降解，目前临床使用制剂为冻干粉针，规格1mg，一次1支，每日1-2次，皮下注射或静脉滴注，用药时间1～24个月不等。长时间频繁注射患者依从性差，影响治疗效果。为提高用药顺应性，减少注射次数，改善治疗效果，本课题组前期对胸腺五肽长效微球进行了研究，以不同规格的乳酸—羟基乙酸共聚物（PLGA）为材料，可获得释药周期15-60天的载药微球。但由于胸腺五肽极性强，水溶性大，其长效微球存在明显的突释效应，24小时突释量高达40％左右，使其长效微球注射剂的发展受到限制。目的：突破多肽蛋白类药物长效微球制剂发展的关键技术，降低胸腺五肽微球突释，制备突释量低、粒径分布均匀、释药性能稳定、质量可控的胸腺五肽微球，为长效注射剂的研究与发展奠定基础。方法：建立微球形态、分散性、粒径及分布、含量、包封率及载药量、释放度等微球质量控制方法。以包封率和24小时突释量为主要指标，单因素考察多种添加剂方案对微球制备结果的影响，并对添加剂降低突释的机理进行探讨。在添加剂筛选基础上，对PLGA材料的规格及来源、粒径控制工艺、微球干燥方式及灭菌条件等进行考察。采用正交试验设计，以突释量、包封率及粒径为指标，优化微球处方和制备工艺。通过影响因素及室温留样试验，评价胸腺五肽微球质量稳定性。建立切实可行的微球残余药量测定方法，并进行系统方法学考察。大鼠皮下注射胸腺五肽微球，于不同时间取注射部位皮下组织，依法测定微球残余药量，绘制体内释药曲线，考察体内释药行为。通过体内外结果的比较，评价微球体内外释药相关性。结果：[1]突释控制技术在内水相加入Tween-20、葡萄糖，油相加入碳酸锌、甘油或乙酸乙酯，外水相加入渗透压物质氯化钠，均可降低微球突释，其中外水相加入氯化钠降低突释的作用最为显著，制得的微球流动性最好。突释降低与氯化钠产生的渗透压有关，氯化钠浓度越大，外水相渗透压越高，内外水相渗透压差越小，微球表面形成的孔隙越少，骨架密度越大，突释量越低。氯化钠浓度在10～15mg／ml，微球突释可控制在13％以下；选择聚合比为50∶50、内在黏度为0.55～0.75dl／g的PLGA，两种来源（美国伯明翰聚合物公司和中国科学院成都高分子材料研究所）的材料制备的微球均具有较高的包封率和较低的突释量；加大高剪切乳化分散机的功率、提高次级乳化速度、延长乳化时间或调节乳化剂PVA的浓度，均有利于微球粒径分布的均一性；冷冻干燥是首选的微球干燥方式，γ射线灭菌对胸腺五肽的化学稳定性有影响，建议采用无菌操作工艺。正交试验优化结果表明，PLGA浓度对微球突释和包封率的影响最为显著，其次是氯化钠浓度，次级乳化速度和PVA浓度主要影响微球的粒径分布。最优组合为PLGA浓度250mg／ml，氯化钠浓度10或15mg／ml，次级乳化速度13000r·min^-1，PVA浓度0.5％。[2]稳定性微球在高温、高湿和强光条件下，不同程度地结块，分散性明显变差；室温放置两个月，微球粒径、含量及突释量没有明显变化，质量稳定。[3]药代动力学研究采用HPLC法测定微球残余药量，加入甲醇破坏皮下组织中的生物酶活性，可确保测定过程中药物的稳定。在选定的测定条件下，内源性物质无干扰，最低检测限1ng，最低定量限3ng；在0.97μg·ml^-1～97μg·ml^-1范围内线性关系良好，日内精密度1.80％，日间精密度9.16％，皮下组织取样及测定的总回收率为59.94％。中科院来源的PLGA材料制备的微球，体内释药周期为1个月，但释药速率明显快于体外，无明显平台期，24小时突释分别为12.03％和3.70％，释药模式基本符合零级方程。选用pH7.4释放介质，可获得良好的体内外相关性。结论：通过突释控制技术及系统处方和工艺优化，制备的微球粒径成正态分布，平均粒径为30～65μm，包封率在85％以上，突释量在5％以下，室温贮存两个月质量稳定。胸腺五肽微球体内1个月累积释放度达93.46％，释药速率比较平稳。课题研究实现了预期目标，为开发1个月给药一次的胸腺五肽长效微球注射剂奠定了基础。