研究目的1.观察吗啡预处理对兔心肌缺血再灌注损伤急性期的剂量依赖性作用,筛选出吗啡预处理中吗啡的最佳实验剂量；2.观察吗啡预处理在最佳实验剂量下对兔心肌缺血再灌注损伤后心室重塑的作用；3.研究吗啡预处理对兔心肌缺血再灌注损伤后心室重塑的作用机制,为吗啡预处理在临床中的使用提供新的实验和理论基础。研究方法1.吗啡预处理对兔心肌缺血再灌注损伤作用的剂量相关性研究。建立在体新西兰兔心肌缺血30min模型,再灌注1天,以血流动力学,心肌酶学及心肌梗死而积为指标探讨不同剂量吗啡对损伤心肌的作用。健康雄性新西兰大白兔52只,随机取4只做假手术组(S),另外48只随机分为生理盐水对照组(NS),吗啡预处理0.03mg/kg组(M1),吗啡预处理0.1mg/kg组(M2),吗啡预处理0.3mg/kg组(M3),吗啡预处理1.0mg/kg组(M4),吗啡预处理3.0mg/kg组(M5),各8只。S组只开胸左室支套线不结扎,NS组于左室支结扎前15分钟予以2ml生理盐水,吗啡预处理各组于左室支结扎前15分钟予以不同剂量的吗啡,均用生理盐水稀释至2ml,1Os静脉注射完毕。松开结扎线30min若无恶性心律失常即逐层关胸,清醒后送返动物房继续饲养1天。1天后,测定兔血流动力学,测定血清肌钙蛋白(cTnI)浓度,并用EB/TTC双染法检测心肌缺血与心肌梗死范围。2.吗啡预处理对兔心肌缺血再灌注损伤后心室重塑的作用观察。建立在体新西兰兔心肌缺血30min模型,再灌注28天,以血流动力学,血.清脑钠素(BNP)水平,兔心脏重量,Masson染色以及兔不同时间点心功能变化为指标探讨吗啡对兔心肌缺血再灌注损伤后心室重塑的作用。健康雄性新西兰大白兔36只,随机取6只作假手术组(S),另外30只随机分为生理盐水对照(NS)组,吗啡预处理(M)组,每组各15只。模型建立同第一部分,术毕送返动物房继续饲养。于术后3天,7天,14天,21天,28天以心脏多普勒超声观察兔心功能,术后28天,测定兔血流动力学,血清BNP水平,兔体重及心脏重量并行Masson染色观察心肌胶原染色情况。3.阿片受体在吗啡预处理抗心室重塑过程中的作用。建立在体新西兰兔心肌缺血30min模型分别使用吗啡预处理及阿片受体抑制剂纳洛酮,以不同时间点血流动力学,血清BNP水平,心功能变化,心肌K受体表达以及28天后兔心脏重量为指标探讨阿片受体在吗啡预处理抗心室重塑过程中的作用。健康雄性新西兰大白兔180只,随机取15只做假于术组(S),另外165只随机分为生理盐水对照(NS)组42只,吗啡预处理(M)组,生理热水纳洛酮(Nal)组及吗啡预处理纳洛酮(M+Nal)组,各41只。模型建立同第一部分,术后1天,3天,7天,14天及28天分别随机处死各组兔6-8只,测定不同时间点兔血流动力学,血清BNP水平,心功能变化并以免疫组化染色法观察心肌K受体表达变化,术后28天称量兔体重及心脏重量。4. TGF-β1及p38MAPK在吗啡预处理抗心室重塑作用中的表达研究。留取第三部分实验中兔心肌组织,以免疫组化染色与Western Blot法检测心肌组织缺血区及远距区TGF-β1及p38MAPK的表达,观察两者在心肌组织不同区域时间上的变化。研究结果1.随吗啡剂量的增加,吗啡预处理组血流动力学各观察指标(MAP, LVESP, dp/dtmax, LVEDP, dp/dtmin)均有先增高后下降的趋势,且均高于NS组。但是与NS组相比,MAP值仅M3,M4组有统计学差异,P<0.05, LVESP值仅M2,M3,M4组有统计学差异,P<0.05, dp/dtmax值仅M3,M4组有统计学差异,P<0.05, LVEDP值M3,M4组有统计学差异,P<0.05, dp/dtmin值仅M3组有统计学差异,P<0.05；吗啡预处理组各组血清肌钙蛋白浓度均低于NS组,与NS组相比,M2组有统计学差异,P<0.05,M3,M4,M5组有显著统计学差异,P<0.01；吗啡预处理各组与NS组缺血区面积无明显差别,与NS组相比,M2,M3,M4,M5组梗死面积有统计学差异,P<0.05,但是M2,M3,M4,M5四组之间梗死面积无统计学差异。2.术后28天,与NS组相比较,M组的MAP, LVESP无明显统计学差异,但是LVEDP绝对值,dp/dtmax及dp/dtmin绝对值均高于NS组,具有统计学意义(P<0.05)；M组血清脑钠素水平明显低于NS组(P<0.01)；各组兔术日体重,处理日体重及体重差无明显差别。术后28天,手术组(NS,M)兔的全心重量及全心体重比均高于S组；左室重量与S组无明显差别,但M组的左室体重比明显高于S组及NS組；而NS组兔的右心室重量及右心体重比均高于M组及S组；Masson胶原染色结果见S组心肌细胞排列紧密整齐,胶原含量很少,NS组心肌细胞间隙明显增宽,纤维组织增生严重,M组心肌细胞间隙增宽程度较小,纤维组织有增生。于术后3天,7天,14天,21天,28天连续动态观察兔心脏彩超,两手术组兔左室射血分数(EF)及短轴收缩率(FS)均出现明显下降趋势。M组的左室射血分数在3天,7天,21天,28天均高于NS组；短轴收缩率在术后各观察点均高于NS组,具有统计学差异。3.术后1天,NS组,NAL组以及M+NAL组血流动力学各指标均差于M组,与NS组相比,NAL组.LVEDP值较高而dp/dtmax较低,术后28天,NS组及NAL组各指标均较M组为差,而M+NAL组血流动力学各指标与M组无统计学差异；术后7天,14天,28天,NS组及NAL组血清脑钠素水平均高于M组,而M+NAL组与M组相比无统计学差异；各组兔术日体重,处理体重及体重差均无统计学差异,各组兔左右室重量无统计学差异,NS, NAL及M+NAL组兔全心重量大于S组,各缺血组全心体重比均高于S组,M+NAL组兔左室体重比高于S组,NS及NAL组兔右室体重比高于S组,其中NAL组右室体重比高于M组及M+NAL组；免疫组织化学染色结果显示,在缺血区,NS组与M组κ受体在术后1天,3天,7天表达有差异,M组与M+NAL组缺血区κ受体在术后1天表达有差异；在远距区,NS组与M组κ受体在术后14天,28天表达有差异,NS组与M+NAL组κ受体表达在术后28天有差异。4.TGF-β1免疫组化染色结果示,兔心肌缺血再灌注损伤早期,缺血区TGF-β1均呈现高表达,但是术后1天NS组表达水平相对M组较低,有统计学差异,远距区心肌的TGF-β1在术后28天时,NS组较M组表达较高,有统计学差异。p38 MAPK染色结果示兔心肌缺血再灌注损伤早期,缺血区p38 MAPK均呈现高表达,术后1天,3天NS表达水平相对吗啡预处理组较高,有统计学差异,远距区心肌的p38 MAPK术后28天,NS组较M组表达较高,有统计学差异。TGF-β1定量分析结果示术后1天M组TGF-β1在缺血区表达水平相对NS较高,有统计学差异,远距区心肌的TGF-β1的表达到术后28天时NS较M组表达较高,有统计学差异。p38 MAPK定量分析结果示兔心肌缺血再灌注损伤后,各时间点缺血区p38 MAPK均呈现高表达,与假手术组相比有统计学差异,术后1天M组p38MAPK在缺血区表达水平相对生理盐水组较低,有统计学差异,远距区心肌的p38 MAPK的表达术后28天NS组较M组表达较高,有统计学差异。实验结论1.吗啡预处理对兔心肌缺血再灌注损伤心肌保护作用存在剂量依赖性,本实验获得的最佳实验剂量为0.3mg/kg,结扎左室支前15min静脉注射。2.吗啡预处理可延迟兔心肌缺血再灌注损伤后的心室重塑,改善兔心功能。3.吗啡预处理的抗心室重塑作用通过激活阿片受体发挥作用,且纳洛酮可暂时性抑制该心肌保护作用但是不能持久阻断。4.吗啡预处理可影响心肌损伤急性期及后期心室重塑过程中TGF-β1及P38MAPK的表达,提示吗啡预处理的抗心室重塑作用可能经由TGF-β-P38MAPK信号通路介导。