石蚕st突变体近等基因系与其回交亲本的蛋白质组学差异分析

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家蚕(Bombyx mori)在我国已有五千多年的饲养历史,有着重要的经济价值。它不仅是鳞翅目昆虫的典型代表,同时也是重要的模式生物。随着家蚕基因组测序的完成,国内外的研究重点将逐渐转向功能基因组的研究。而蛋白质是基因功能的实施者,是生命过程及现象的直接体现者,没有对蛋白质进行深入的分析,就无法了解到生物学问题发生的本质。新突变是遗传学研究的重要对象,也是功能基因研究的主要材料,遗传学发展的众多成果取得都得益于对突变基因的研究。家蚕有四百多种突变品种,石蚕st是其中比较典型的体型突变之一。其最主要的特征就是表皮紧绷,身体硬实,各环节后缘肿胀,且这种性状在5龄盛食期至上簇前表现尤为明显。目前双向凝胶电泳技术联合质谱技术是蛋白质组学研究中应用最为广泛的分析方法,这恰好为突变材料的研究提供了良好的机会,利用其原理简单,操作便捷的研究特点,通过比较突变蚕体与正常蚕体的组织样品,可以找出与突变基因功能相关的关键蛋白,充分地阐明突变基因的遗传基础,扩大研究利用。本文首先以家蚕C108为回交亲本构建了石蚕st近等基因系C8,通过研究C8与C108的差异性来反应石蚕st突变体与野生型差异。比较C8与C108表皮的几丁质含量,发现C8表皮组织中几丁质含量比C108中稍低,但差异并不显著,几丁质含量与这种突变性状的形成关系还需进一步研究。其次本文运用蛋白质双向电泳技术比较分析了C8与C108的表皮组织、中肠组织、脂肪体组织的蛋白质构成差异,利用软件分析挑选了39个蛋白进行基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS),成功鉴定31个蛋白,其中以酶类蛋白为主,还包括结构蛋白、转录因子、热激蛋白、糖蛋白、转运蛋白等等,另外还鉴定到5个功能未知蛋白。为了对双向电泳结果进行验证,本文从已鉴定到的差异蛋白中挑选GSTd2、GSTs1、Pglym、Tpi、Pdi5个酶类蛋白基因,以家蚕RpS3基因为内参,利用Real-timePCR分析这5个酶类基因在C8与C108的5龄第5天幼虫表皮中的相对表达水平,结果与二维电泳基本一致,但其中只有GSTs1、Pglym、Tpi这3个基因的转录差异达到显著水平(P<0.05)。这3个基因是怎样受到调控来影响性状的形成还需进一步研究。
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