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林木通常经过幼龄期的营养生长后,在一系列的内、外因素(如春化等)的作用下,进入开花期的生殖生长阶段,随即其营养生殖会减缓,甚至停滞,即便进入滞长期。FT基因编码MADS-box蛋白,受CO、SOC1、AGL24等基因激活或受FLC等基因抑制后,最终激活花分生组织特异性基因AP1和LFY,促进植物开花。因此,若可以使FT基因在杨树中表达量下降,便可能会推迟其开花,保持较长的营养生长期(童期),提高树木的生长量,就可能会大大增加木材产量。相反,若使FT基因过量表达,可能会促进杨树提前开花,可以加速育种进程,缩短育种周期。从小黑杨叶片中成功提取出总RNA,并克隆获得525bp的cDNA片段,该片段的测序结果与拟南芥AtFT基因进行同源性比对,相似性高达70%以上,为小黑杨FT-like基因,命名为PnFT1。利用传统的酶切、连接的载体构建方法将克隆得到的PnFT1插入到pET-52b的多克隆位点上,获得PnFT1-pET-52b重组载体。对PnFT1基因进行稀有密码子预测分析,PnFT1基因中有24.5%的密码子为大肠杆菌稀有密码子,为保证PnFT1基因在大肠杆菌中正常表达选取RosettaTM菌株为大肠杆菌表达型菌株。携带PnFT1-pET-52b重组质粒的大肠杆菌Rosetta经IPTG诱导后,获得菌体总蛋白经SDS-PAGE检测分析,获得的PnFT1重组蛋白的分子量为28KD,且过量表达的PnFT1重组蛋白是以包涵体形式存在的。将PnFT1融合蛋白经包涵体纯化、电洗脱纯化、透析、沉淀后,获得的蛋白质样品,浓度可达到lOug/ul,纯度达到90%以上,且不含有SDS、尿素、考马斯亮蓝染料等不利于抗体制备的试剂,完全达到制备多克隆抗体的蛋白质样品标准,制备多克隆抗体。为利用反向遗传学技术进行PnFTl基因的功能基因组学的研究,分别应用传统的载体构建和In-fusion技术将PnFT1基因构建到植物超表达载体pROKⅡ和植物RNAi表达载体pFGC5941上,已获得PnFT1- pROKⅡ和PnFT1(F)-pFGC5941-PnFTl(R)重组载体。本研究获得了PnFT1基因的原核表达载体、植物超表达载体和植物RNAi表达载体,并得到PnFT1融合蛋白及多克隆抗体,为进一步研究PnFT1基因的功能奠定了基础,同时为揭示杨树花发育的分子机理研究和成花的分子网络调控系统研究奠定了理论基础,对培育杨树优良品种具有重要意义。