第一部分：真核系统中Hsp60的表达、纯化和糖基化修饰研究　　人热休克蛋白60(Heat shock protein 60)最初被认为是一种定位在线粒体的蛋白质，在体内发挥分子伴侣的功能。近年来，越来越多的研究开始关注细胞表面和释放到细胞外的Hsp60的功能。在免疫系统中，Hsp60被认为是一种危险信号。然而，由于以往研究中所用的Hsp60主要来源于原核系统，可能会污染有LPS等细菌成分，所以也有研究认为Hsp60所引起的免疫反应可能与这些污染的原核成分有关。在本研究中，我们用分泌信号肽替换了Hsp60基因序列中原有的线粒体定位信号肽，构建了真核系统Hsp60的表达质粒，应用真核表达系统获得了分泌的Hsp60蛋白，并验证了目的蛋白与巨噬细胞的结合能力。同时，我们在研究中发现，经真核分泌途径获得的Hsp60会发生N-糖基化修饰，并且N-糖链并非连接在经典三联子序列(Asn-X-Ser/Thr)中的天冬酰胺上，提示Hsp60氨基酸序列中可能存在非经典的N.糖基化修饰位点。　　第二部分：可溶性形式C型凝集素样受体CLEC-2产生和调控的研究　　C型凝集素受体-2(CLEC-2)是C型凝集素超级族分子中最新被鉴定的一种Ⅱ型跨膜蛋白。已有的研究表明，这种受体能够识别蛇毒rhodocytin和肿瘤抗原podoplanin，介导血小板聚集、肿瘤逃逸等多种体内过程。我们在之前的研究中发现，小鼠来源的CLEC-2可以被剪切为可溶的形式而释放到培养上清中。在体内，剪切是受体功能调节的重要方式；剪切过程产生的可溶性片段，对相关疾病的早期诊断和预后有一定的指导意义。因此，在本研究中，我们研究了人CLEC-2产生可溶性片段的可能性。结果表明，虽然在非刺激情况下，由于颈部区序列的差异，我们不能检测到人CLEC-2可溶性片段的产生；但是，当用PMA刺激外源性细胞或血小板，活化PKC通路后，我们会在培养环境中检测到可溶性的CLEC-2片段。同时，我们在研究中发现，人CLEC-2可溶性片段的产生，依赖于分子的N.糖基化状态。人CLEC-2分子胞外段的三个潜在的N-糖基化位点上都连有糖链，当突变任一糖基化位点时，即使蛋白仍然能定位在细胞膜表面，可溶性CLEC-2片段仍然不能被检测到。这表明，人CLEC-2可溶性片段的产生是一个依赖于N-糖链的可调节过程。