C6/36核病毒(C6/36DNV)是本实验室2002年从白纹伊蚊C6/36培养细胞中分离出来的一株新的浓核病毒，属细小病毒科浓核病毒亚科短浓核病毒属。它大小约25nm，无包膜，衣壳呈T=1的二十面体对称，衣壳蛋白组成简单(由结构蛋白VP1和VP2组成)，核酸序列短(基因组为单链DNA，共4094个碱基)，十分有利于病毒结构与装配的研究。2004年，本实验室进行了C6/36DNV 基因组全序列分析，并测定了野生C6/36DNV 15.6A分辨率的三维结构。 为进一步弄清参与C6/36DNV衣壳组装的必需氨基酸序列，探讨体外组装的VLPs与野生株三维结构的异同，阐明C6/36DNV衣壳蛋白结构与功能之间的关系，本文采用分子生物学、冷冻电镜计算机三维重构技术和生物信息学方法，对C6/36 DNV的体外组装与结构进行了研究，并对其结构蛋白功能域作了详尽的预测，获得了以下结果： 1．通过在大肠杆菌表达系统中表达C6/36DNV的结构蛋白VP1(40kD)和VP2(39kD)，均得到了大小约20nm的VLPs，但表达蛋白多以包涵体形式存在。 2．在昆虫杆状病毒表达系统中分别或共同表达了C6/36DNV的VP1和VP2，纯化后均得到了与野生C6/36DNV形态相似，但大小略小的VLPs(20nm)；三种VLPs(VP1-VLPs、VP2-VLPs和VP1/VP2-VLPs)均呈二十面体对称，超薄切片显示它们均可在Sf9细胞的细胞核和细胞质里聚集，形成晶格状排列。 3．采用分子生物学技术，逐段截短C6/36 DNV结构蛋白的N端和C端序列，研究了结构蛋白的氨基酸序列与病毒组装的关系，结果表明：N端的GGSG序列(aa23-26)，即细小病毒科病毒所特有的甘氨酸保守区，和C-端的5～15个氨基酸对C6/36 DNV衣壳的装配非常重要，截短这些序列后病毒不能再组装；而截短VP1 N端的GTKRKR(aa15-20)，即推测的核定位信号序列后，组装的VLPs不再能形成品格状排列，说明该段序列对于维系病毒蛋白间相互作用非常重要。 4．应用冷冻电镜和计算机三维重构技术，获得了20A分辨率的C6/36DNVVP1-VLPs的三维结构。通过对野生C6/36DNV和VP1-VLPs三维结构的比较，发现它们在一些主要结构特征上比较相似：如每个五次轴的顶点处可看到有突起；每个三次轴的顶点处有一个类三角形的凹陷；衣壳蛋白的走向也比较一致。但二者也有一定的差异。 5．通过序列比对和进化树分析，建立了短浓核病毒的进化假说，确立了短浓核病毒属在细小病毒科中的独特地位；综合C6/36DNV体外组装、三维结构测定、同源比对及二级结构预测结果，预测其N端功能域在病毒粒子中倾向于伸出；预测C6/36DNV VP1的“E<,167>P<,168>”位点，可能是受体结合位点。