基于化学—生物指纹图谱技术的山东道地药材全蝎质量评价研究

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目的:在当前国内外中药材系统质量评价研究方法的基础上,选择山东道地药材全蝎为样品,建立全蝎的化学活性成分指纹图谱、生物指纹图谱,从全蝎生物物种遗传物质鉴别和化学成分定性定量鉴别等多方面、多角度评价中药全蝎的质量,为山东道地药材全蝎的质量评价研究提供科学依据。方法:以蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳法(PAGE)、随机扩增的多态性DNA技术(RAPD)等现代生物方法建立全蝎的生物指纹图谱。以紫外光谱法(UV)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)等现代分析方法建立全蝎的化学活性成分指纹图谱。并将本课题的研究成果与2010版《中国药典》中全蝎药材的现行质量标准相结合,拟制定山东省全蝎药材质量标准(草案)和起草说明,建立全蝎药材的质量评价体系。结果:1、建立了全蝎药材五种提取溶剂的紫外光谱图,结果显示,山东省不同产地全蝎药材的紫外谱线组图非常接近,有其共有特征峰,表明其主要成分团在不同产地样品中是相同或类似的。2、建立了以全蝎对照药材为参照峰的全蝎药材HPLC指纹图谱,标定了19个共有峰作为全蝎HPLC指纹图谱的共有峰,且共有峰面积均占总峰面积的90%以上。3、对山东省全蝎药材进行气-质联用分析(GC-MS),确定了各产地全蝎药材脂溶性成分,共检测出9个共有峰,且共有峰面积均占总峰面积的90%以上。提出以含量最高的三种成分3-十二炔:亚油酸甲酯:十六酸甲酯=(1.64±0.23):1:(0.66±0.18)的比例作为鉴定全蝎脂溶性成分的指纹性指标。4、通过对全蝎蛋白PAGE电泳图谱的比对,得出6个共带,占总峰面积的79.2%~97.9%,且带的显色深浅、宽窄、泳动率相似,可见共有蛋白峰能够较好的反映全蝎蛋白的整体表达。5、RAPD扩增多态性分析结果显示,多态条带比率为73.91%,表明试验的不同产地全蝎样品之间RAPD条带多态性高,遗传多样性丰富。6、制定山东省全蝎药材质量标准(草案)和起草说明,初步建立全蝎药材的质量评价体系。结论:本研究较全面系统地开展了山东道地药材全蝎的品质相关研究,对不同产地全蝎UV、HPLC指纹图谱、全蝎脂溶性组分及其比例关系、生物指纹图谱等方面进行了研究探讨。初步建立了山东道地药材全蝎药材质量评价体系,为全蝎的品种鉴别和质量评价提供了更为准确、有效的系统评价方法和依据。
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