【摘 要】
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双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)是脊椎动物中由干扰素介导的抗病毒防御机制的重要组成部分。鲫鱼抗病毒相关基因(CaPKR-like)则是在鱼类中首次报道的PKR基因同源物。本文一方面
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双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)是脊椎动物中由干扰素介导的抗病毒防御机制的重要组成部分。鲫鱼抗病毒相关基因(CaPKR-like)则是在鱼类中首次报道的PKR基因同源物。本文一方面从Poly I:C诱导处理的或未处理的鲫鱼中,提取总RNA,通过RT-PCR,检测CaPKR-like在鲫鱼组织中的表达情况;另一方面扩增CaPKR-like C端片段(激酶催化区),构建重组表达质粒pGEX-KG/CaPKR-like-C,转化大肠杆菌BL21。筛选出的表达菌用IPTG诱导,10%SDS-PAGE电泳。纯化的表达产物作为抗原,免疫家兔。用制备的多抗,通过蛋白免疫印迹法,检测CaPKR-like在鲫鱼各组织以及鲫鱼囊胚培养细胞中的表达情况。 和哺乳类PKR相似,CaPKR-like在未免疫处理的鲫鱼组织中以及正常CAB细胞中低水平的组成型表达。Poly I:C诱导处理后,CaPKR-like的表达量增加。Western blots的结果也证实了这点。以上结果表明:CaPKR-like基因具有与哺乳类PKR很相似的激活和诱导途径。
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