【摘 要】
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目的:基于miR-21/miR-122调控机制研究益气化瘀解毒方对人肝癌QGY7702/Sora耐药细胞株的影响,进一步探讨益气化瘀解毒方对拮抗肝癌Sorafenib耐药的可能作用机制,为临床应用益气化瘀解毒方拮抗肝癌Sorafenib耐药提供科学依据。方法:体外培养QGY7702细胞,用大剂量冲击法结合低剂量维持法诱导建立对Sorafenib耐药QGY7702/Sora细胞株。实验共设置5组,空
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目的:基于miR-21/miR-122调控机制研究益气化瘀解毒方对人肝癌QGY7702/Sora耐药细胞株的影响,进一步探讨益气化瘀解毒方对拮抗肝癌Sorafenib耐药的可能作用机制,为临床应用益气化瘀解毒方拮抗肝癌Sorafenib耐药提供科学依据。方法:体外培养QGY7702细胞,用大剂量冲击法结合低剂量维持法诱导建立对Sorafenib耐药QGY7702/Sora细胞株。实验共设置5组,空白组、模型组、益气化瘀解毒方组、Sorafenib组、益气化瘀解毒方联合Sorafenib组。CCK-8法检测Sorafenib半数抑制率浓度(IC50)及耐药指数(RI)。实验组分别用IC50浓度干预,空白组、模型组用完全培养基培养,干预48h后收集细胞。采用实时荧光定量PCR法(RT-q PCR)检测miR-21、miR-122的表达量;采用Western blot检测HIF-1α、VEGF、E-Cad、Bcl-2蛋白的表达。结果:1.成功培育QGY7702/Sora耐药细胞株。亲本细胞与耐药细胞的Sorafenib半数抑制浓度(IC50)分别为:(7.99±0.52)μmol/L、(19.65±1.22)μmol/L。耐药指数为:(2.49±0.28)。2.与亲本细胞相比,耐药细胞miR-21过表达,miR-122低表达(P<0.01)。药物干预后,除Sorafenib组外,各组miR-21的表达量显著降低(P<0.01),其中益气化瘀解毒方组抑制作用最明显(P<0.01);各组miR-122的表达量均增加(P<0.01),其中益气化瘀解毒方组增强作用最显著(P<0.01)。3.与亲本细胞比较,耐药细胞HIF-1α、VEGF、Bcl-2过表达(P<0.05),E-Cad低表达(P<0.05)。药物干预后,各组HIF-1α含量显著降低(P<0.01),其中益气化瘀解毒方组抑制作用最显著(P<0.01);各组VEGF的表达量显著降低(P<0.01),其中益气化瘀解毒方联合Sorafenib干预组抑制作用最明显(P<0.05);各组E-Cad表达量显著增加(P<0.01),其中益气化瘀解毒方联合Sorafenib组促进作用最显著(P<0.01);各组Bcl-2表达量均下降(P<0.05),其中益气化瘀解毒方组抑制作用最显著(P<0.01)。结论:益气化瘀解毒方可通过改善肿瘤乏氧微环境调控miR-21/miR-122的表达,降低VEGF的表达抑制血管生成,促进E-Cad表达抑制EMT进程,抑制Bcl-2表达促进细胞凋亡等相关作用拮抗人肝癌QGY7702/Sora细胞对Sorafenib耐药。
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